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雞沙門氏菌酶聯(lián)免疫分析試劑盒實驗原理

閱讀:1072      發(fā)布時間:2013-04-24
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檢測范圍: 96T
0.3pg/ml-12pg/ml 
使用目的:
本試劑盒用于測定雞血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中沙門氏菌(Salmonella)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中雞沙門氏菌(Salmonella)水平,。用純化的雞沙門氏菌(Salmonella)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入沙門氏菌(Salmonella),,再與HRP 標(biāo)記的沙門氏菌(Salmonella)抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色,。TMB HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的沙門氏菌(Salmonella)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中雞沙門氏(Salmonella)濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 7 終止液 6ml×1
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 8 標(biāo)準(zhǔn)品(20pg/ml0.5ml×1
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1
4 樣品稀釋液 6ml×1 10 說明書 1
5 顯色劑A 6ml×1 11 封板膜 2
6 顯色劑B 6ml×1/12 密封袋 1
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
10pg/ml 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5pg/ml 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.5pg/ml 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.25pg/ml 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.625pg/ml 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5 倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,,如此重復(fù)5 次,,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同3
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值),。測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

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