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試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定犬血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中瘟熱病毒抗體（CDV Ab）表達(dá),。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中犬瘟熱病毒抗體（CDV Ab）表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板,，制成固相抗原,，可與樣品中瘟熱病毒抗體（CDV Ab）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP 標(biāo)記的抗原結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色,。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）,，與CUTOFF 值相比較,，從而判定標(biāo)本中犬瘟熱病毒抗體（CDV Ab）的存在與否。

試劑盒組成：

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 陽(yáng)性對(duì)照 0.5ml×1 瓶

3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 陰性對(duì)照 0.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說(shuō)明書(shū) 1 份

5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3 的樣品,，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2 孔,、陽(yáng)性對(duì)照2 孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl,。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻，

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù)5 次,，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同3,。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

操作程序總結(jié)：

計(jì)算和結(jié)果判定：

試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10

臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為瘟熱病毒抗體（CDV Ab）陰性

陽(yáng)性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為瘟熱病毒抗體（CDV Ab）陽(yáng)性

注意事項(xiàng)

1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

5．底物請(qǐng)避光保存。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),，參考波長(zhǎng)為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M 的硫酸,，使用時(shí)必須

注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃,。

2．有效期：6 個(gè)月