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檢測范圍： 96T

0.6pg/ml-20pg/ml

使用目的：

本試劑盒用于測定水中過氧化氫（H2O2）含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中過氧化氫（H2O2）水平,。用純化的過氧化氫（H2O2）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入過氧化氫（H2O2），再與HRP 標記的過氧化氫（H2O2）抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的過氧化氫（H2O2）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，通過標準曲線計算樣品中過氧化氫（H2O2）濃度,。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（40pg/ml） 0.5ml×1 瓶

3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份

5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

20pg/ml 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

10pg/ml 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

5pg/ml 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2.5pg/ml 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

1.25pg/ml 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5 倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去,，如此重復5 次，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3,。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。

11. 測定：以空白空調零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6 個月