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5-羥色胺（5-HT）ELISA試劑盒說明書

閱讀：808 發(fā)布時間：2013-01-21
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5-羥色胺（5-HT）ELISA試劑盒說明書
檢測方法：比色
特異性:酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒不顯示交??叉反應(yīng)性,，與任何細(xì)胞因子。
原則:犬的5 - 羥色胺（5HT）的酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附試驗犬5 - 羥色胺（5HT）,，血清,，血漿，組織,，細(xì)胞培養(yǎng)上清液和尿液的定量測量,。犬的5 - 羥色胺（5HT）的多克隆抗體的預(yù)涂到96孔板中。標(biāo)準(zhǔn)和樣品吸入的井及犬5 - 羥色胺（5HT）的樣品中存在的由固定化的抗體與孔結(jié)合的,。生物素化的抗體檢測方法,，加入到孔中，然后接著用PBS或TBS緩沖液洗滌,。在洗去未結(jié)合的生物素化抗體,，親和素 - 過氧化物酶復(fù)合物被移液到各孔中。再次洗滌井,，TMB底物溶液加入到各孔中和后,，加入酸性停止溶液的顏色變化,。夏季風(fēng)犬5 - 羥色胺（5HT）的綁定,，并且在450nm處測量的量是成比例的+ / - 10nm的。
試劑準(zhǔn)備:
A）標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備應(yīng)在實驗前準(zhǔn)備不超過2小時,。到一個試管中,，加入1毫升樣品稀釋緩沖液溶解的標(biāo)準(zhǔn)*倍稀釋。
B）制備的生物素化的抗犬96T,。
2,。標(biāo)準(zhǔn)：96測試（2瓶）
3。應(yīng)在1:99稀釋檢測抗體犬5 -羥色胺（5-HT）抗體的抗體稀釋緩沖液充分混合,，
C）制備親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）工作的解決方案：解決方案應(yīng)該準(zhǔn)備不超過實驗前1小時
,。的總體積應(yīng)為：0.1ml/well×（孔數(shù)）。（允許超過總體積的0.1?0.2毫升）
,。親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）應(yīng)在1:99稀釋的ABC稀釋液充分混合,。
ð）制備的TMB工作的解決方案：轉(zhuǎn)移9倍體積的TMB色劑A在1體積的TMB色發(fā)展中國家試劑B為30分鐘，在37℃下,，在使用前使TMB底物中,，充分?jǐn)嚢琛?br />檢測步驟:用戶應(yīng)確定樣品稀釋倍數(shù)粗略的估計犬5 -羥色胺（5-HT）的樣本量。
1,。等分0.1毫升每孔的的等級犬5 -羥色胺（5HT）的標(biāo)準(zhǔn)溶液到預(yù)涂的96孔板中,。添加到控制以及樣品稀釋液0.1ml的緩沖。將0.1ml的血清，血漿,，體液,，組織裂解物或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的每個適當(dāng)稀釋的樣品添加到每個空。
2,。密封板與蓋和在37℃下孵育90分鐘,。
3。取下蓋子,，舍棄板的內(nèi)容,，涂抹到紙巾或其它吸水材料板。在任何時候不要讓井*干涸,，洗滌兩次,。
4。向每個孔中加入0.1ml的生物素化的抗犬的5 -羥色胺（5HT）的抗體工作液孵育該板在37℃下60分鐘,。
5,。三次用0.01M TBS或0.01M PBS洗板，每一次讓清洗緩沖液留在孔中,，持續(xù)1分鐘,。
6。導(dǎo)入各孔中,，并加入0.1ml的制備ABC工作液,，在37℃下孵育板30分鐘。
7,。將板洗滌5次,，用0.01M TBS或0.01M PBS，并每次讓留在井清洗緩沖液為1-2分鐘,。
8,。0.09毫升的準(zhǔn)備TMB顯色劑添加到每口井，并培育板在37°Ç距離,，觀察顏色時,，任何時候都可以看到深淺不一的藍(lán)，在井的三四個集中的犬5 -羥色胺（5-HT）標(biāo)準(zhǔn)的解決方案,。其他水井沒有明顯的顏色,。每孔加入0.1ml的準(zhǔn)備TMB的一站式解決方案。立即變成黃色的顏色變化,。
9,。閱讀的OD在酶標(biāo)儀在450nm處的吸光度，在30分鐘之內(nèi)加入停止溶液后,，
10,?？梢岳L制成每個標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對OD 450（Y）對各自的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（X）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。犬的5 -羥色胺（5HT）的樣品的濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)插,。

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