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5-羥色胺（5-HT）ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)

閱讀：866 發(fā)布時(shí)間：2013-01-21

5-羥色胺（5-HT）ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
檢測(cè)方法：比色
特異性:酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒不顯示交??叉反應(yīng)性，與任何細(xì)胞因子,。
原則:犬的5 - 羥色胺（5HT）的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒是一種體外酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)犬5 - 羥色胺（5HT）,，血清，血漿,，組織,，細(xì)胞培養(yǎng)上清液和尿液的定量測(cè)量。犬的5 - 羥色胺（5HT）的多克隆抗體的預(yù)涂到96孔板中,。標(biāo)準(zhǔn)和樣品吸入的井及犬5 - 羥色胺（5HT）的樣品中存在的由固定化的抗體與孔結(jié)合的,。生物素化的抗體檢測(cè)方法，加入到孔中,，然后接著用PBS或TBS緩沖液洗滌,。在洗去未結(jié)合的生物素化抗體，親和素 - 過(guò)氧化物酶復(fù)合物被移液到各孔中,。再次洗滌井,，TMB底物溶液加入到各孔中和后，加入酸性停止溶液的顏色變化,。夏季風(fēng)犬5 - 羥色胺（5HT）的綁定,，并且在450nm處測(cè)量的量是成比例的+ / - 10nm的。
試劑準(zhǔn)備:
A）標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備不超過(guò)2小時(shí),。到一個(gè)試管中,，加入1毫升樣品稀釋緩沖液溶解的標(biāo)準(zhǔn)*倍稀釋。
B）制備的生物素化的抗犬96T,。
2,。標(biāo)準(zhǔn)：96測(cè)試（2瓶）
3。應(yīng)在1:99稀釋檢測(cè)抗體犬5 -羥色胺（5-HT）抗體的抗體稀釋緩沖液充分混合,，
C）制備親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（ABC）工作的解決方案：解決方案應(yīng)該準(zhǔn)備不超過(guò)實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)
,。的總體積應(yīng)為：0.1ml/well×（孔數(shù)）。（允許超過(guò)總體積的0.1?0.2毫升）
,。親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（ABC）應(yīng)在1:99稀釋的ABC稀釋液充分混合,。
ð）制備的TMB工作的解決方案：轉(zhuǎn)移9倍體積的TMB色劑A在1體積的TMB色發(fā)展中國(guó)家試劑B為30分鐘，在37℃下,，在使用前使TMB底物中,，充分?jǐn)嚢琛?br />檢測(cè)步驟:用戶應(yīng)確定樣品稀釋倍數(shù)粗略的估計(jì)犬5 -羥色胺（5-HT）的樣本量。
1,。等分0.1毫升每孔的的等級(jí)犬5 -羥色胺（5HT）的標(biāo)準(zhǔn)溶液到預(yù)涂的96孔板中。添加到控制以及樣品稀釋液0.1ml的緩沖,。將0.1ml的血清,，血漿,，體液，組織裂解物或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的每個(gè)適當(dāng)稀釋的樣品添加到每個(gè)空,。
2,。密封板與蓋和在37℃下孵育90分鐘。
3,。取下蓋子,，舍棄板的內(nèi)容，涂抹到紙巾或其它吸水材料板,。在任何時(shí)候不要讓井*干涸,，洗滌兩次。
4,。向每個(gè)孔中加入0.1ml的生物素化的抗犬的5 -羥色胺（5HT）的抗體工作液孵育該板在37℃下60分鐘,。
5。三次用0.01M TBS或0.01M PBS洗板,，每一次讓清洗緩沖液留在孔中,，持續(xù)1分鐘。
6,。導(dǎo)入各孔中,，并加入0.1ml的制備ABC工作液，在37℃下孵育板30分鐘,。
7,。將板洗滌5次，用0.01M TBS或0.01M PBS,，并每次讓留在井清洗緩沖液為1-2分鐘,。
8。0.09毫升的準(zhǔn)備TMB顯色劑添加到每口井,，并培育板在37°Ç距離,，觀察顏色時(shí)，任何時(shí)候都可以看到深淺不一的藍(lán),，在井的三四個(gè)集中的犬5 -羥色胺（5-HT）標(biāo)準(zhǔn)的解決方案,。其他水井沒(méi)有明顯的顏色。每孔加入0.1ml的準(zhǔn)備TMB的一站式解決方案,。立即變成黃色的顏色變化,。
9。閱讀的OD在酶標(biāo)儀在450nm處的吸光度,，在30分鐘之內(nèi)加入停止溶液后,，
10。可以繪制成每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)OD 450（Y）對(duì)各自的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（X）的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。犬的5 -羥色胺（5HT）的樣品的濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)插,。

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