胰蛋白酶活性測(cè)定
原理:胰蛋白酶能催化蛋白質(zhì)的水解,,對(duì)于由堿性氨基酸(如精氨酸、賴氨酸)的羧基與其他氨基酸的氨基所形成的肽鍵具有高度的專一性,。此外,,胰蛋白酶也能催化由堿性氨基酸的羧基所形成的酰胺鍵和酯鍵,有高度的專一性仍表現(xiàn)為對(duì)堿性氨基酸羧基一側(cè)的選擇對(duì)此等化學(xué)鍵的催化水解活性的敏感度為:酯鍵>酰胺鍵>肽鍵,。因此,,可以利用含有這些化學(xué)鍵中任一種鍵型的底物來研究胰蛋白酶的專一催化活性。
在動(dòng)物胰臟中,,胰蛋白酶是以無活性的酶原狀態(tài)存在的,。在生理?xiàng)l件下,胰蛋白酶原隨胰液分泌十二指腸后,,在小腸上腔有Ca2+的環(huán)境中,,為腸激酶或胰蛋白酶所激活,其肽鏈N-端的賴氨酸與異亮氨酸之間的一個(gè)肽鍵被水解,,失去一個(gè)酸性6肽,,其分子構(gòu)象發(fā)生一定的改變后轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂写呋鞍踪|(zhì)水解活性的胰蛋白酶。
胰蛋白酶原分子量約為24000,,其等電點(diǎn)為pH8.9,;胰蛋白酶的分子量約為23400,其等電點(diǎn)為pH10.8,。
胰蛋白酶在pH3.0時(shí)穩(wěn)定,,其濃溶液可貯存于冰箱(0℃以下)數(shù)周而活性無顯著喪失,。pH<3時(shí),胰蛋白酶易變性,。PH>5時(shí),,胰蛋白酶易自溶。胰蛋白酶催化活性的適pH為7.6~7.8,。
重金屬離子,、有機(jī)磷化合物和反應(yīng)產(chǎn)物都能抑制胰蛋白酶的活性。胰臟,、卵清和大豆中也含有一些蛋白質(zhì)對(duì)胰蛋白酶活性具有抑制作用,。
保存條件:
①胰蛋白酶底物粉劑:4℃保存條件下3個(gè)月內(nèi)有效
②胰蛋白酶底物稀釋液:4℃保存條件下3個(gè)月內(nèi)有效
③樣本勻漿介質(zhì):4℃保存條件下6個(gè)月內(nèi)有效
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