BCA蛋白檢測試劑(二喹啉甲酸)
BCA蛋白定量試劑應(yīng)用:
蛋白質(zhì):蛋白質(zhì)相互作用研究
測量柱分?jǐn)?shù)親和層析后
膜蛋白的細(xì)胞提取物的百分回收率估算
的融合蛋白的高通量篩選
亮點(diǎn):
色度-估計(jì)目視或測量標(biāo)準(zhǔn)的分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀(562nm)
優(yōu)良的均勻性-展品較少的蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)的變化比染料結(jié)合的方法
兼容-不受大多數(shù)離子和非離子型洗滌劑的典型濃度
適度快速-更容易和4倍的速度比傳統(tǒng)的Lowry法
高線性-對(duì)BSA的線性工作范圍相當(dāng)于20?2000μg/mL
敏感-檢測液5μg/ml增強(qiáng)協(xié)議,。
如何BCA蛋白定量試劑檢測蛋白質(zhì):
BCA蛋白測定相結(jié)合的公知的還原的Cu2+為Cu1+蛋白在堿性介質(zhì)中的高靈敏度和選擇性的二喹啉甲酸亞銅陽離子(銅1+)由比色法檢測,。*個(gè)步驟是在堿性環(huán)境中,以形成光的藍(lán)色絡(luò)合物與蛋白質(zhì)的螯合銅,。含有三個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基的肽在該反應(yīng)中,,被稱為雙縮脲反應(yīng),生成有色絡(luò)合物配合物與二價(jià)銅離子在堿性環(huán)境中,,含有酒石酸鈉鉀,。
在第二步驟中的彩色顯影反應(yīng),二辛可寧酸(BCA)與減少(亞銅)的*個(gè)步驟中形成的陽離子反應(yīng),。激烈的紫色色反應(yīng)產(chǎn)物的查詢結(jié)果從兩個(gè)分子的BCA螯合與一個(gè)一價(jià)銅離子,。的BCA/銅配合物是水溶性的,并表現(xiàn)出強(qiáng)的線性增加蛋白質(zhì)濃度在562nm處的吸光度,。的BCA試劑是更敏感(檢測下限)的*反應(yīng)比淡藍(lán)色的顏色的約100倍,。
BCA顏色形成的反應(yīng),導(dǎo)致由四個(gè)位的氨基酸序列的蛋白質(zhì)的氨基酸殘基(半胱氨酸或胱氨酸,,酪氨酸和色氨酸)的強(qiáng)烈影響,。然而,,不像在考馬斯亮藍(lán)染料結(jié)合的方法中,,普遍的肽骨架也有助于顏色的形成,有助于大限度地減少由蛋白質(zhì)組成差異引起的變異,。
產(chǎn)品詳細(xì)說明:
物質(zhì) 支持的濃度 物質(zhì) 支持的濃度 NP-40 5.00% 葡萄糖(鮮) 10mM的 EMULG??EN 1.00% EDTA 10mM的 HEPES 100毫 氯化鈉 1.0M DTT 1mM的 氫氧化鈉 0.1M 胍•鹽酸 4.0M 硫酸銨 1.5M 的Triton X-100的 5.00% 醋酸鈉,,pH值5.5; 200mM的 辛基-β-葡糖苷 5.00% SDS 5.00% 尿素 3.0 M 的Brij-35 5.00% 蔗糖(鮮) 40% 蘆布若爾 1.00% 甘氨酸,pH 2.8 100毫 CHAPS 5.00%
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