流式細(xì)胞儀和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色
無紅細(xì)胞的單細(xì)胞懸浮液制備的脾細(xì)胞,，刀豆蛋白A爆炸或PBL在FACS緩沖液（PBS中，用1％牛血清白蛋白和0.05％NaN的3）和細(xì)胞進(jìn)行染色,，在黑暗中在冰上20分鐘,，進(jìn)行表面的表達(dá)CD8α（ APC-CY7），CD4（PerCP CY5.5）,，CD3ε（FITC）,，CD137（FITC）,，CD19（PerCP-Cy5.5標(biāo)記），或NK1.1（PE-CY7所有的抗體,，BD生物科學(xué),，圣地亞哥， CA）,。細(xì)胞內(nèi)染色,，細(xì)胞透性使用的Cytofix / Cytoperm試劑盒，根據(jù)生產(chǎn)商的方案,，和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子使用腫瘤壞死因子-α,，腫瘤壞死因子-α或IFN-γ（PR-700，BD生物科學(xué)）,。四聚體分析,，進(jìn)行溫育的細(xì)胞懸浮液與H2-K b / TRP-2的180-188四聚體（SVYDFFVWL，APC-標(biāo)記,，Sanquin,，）或H2-K b / OVA 257-264四聚體，實(shí)物禮品CM 25分鐘,，在37°C和5％CO 2之前,，隨后的表面抗體染色。表面MHC-I類檢測(cè)是由孵化IFN-γ引物和未曝光B16.F10細(xì)胞與小鼠抗鼠MHC I類抗體,，圣迭戈,，隨后孵育檢測(cè)的山羊抗小鼠IgG2a抗體，測(cè)量樣品在FACS廣東II流式細(xì)胞儀（Beckton Dickinson公司,，圣迭戈,，CA）。使用FlowJo軟件的數(shù)據(jù)進(jìn)行了分析,。
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