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小鼠游離甲狀腺激素(FT4)酶聯(lián)免疫分析

閱讀:748      發(fā)布時間:2012-07-06
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48T/96T小鼠游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒的詳細資料:
 
小鼠游離甲狀腺激素(FT4)酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用      目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,,血漿及相關(guān)液體樣本中游離甲狀腺激素(FT4)的含量。
實驗原理:
  本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠游離甲狀腺激素(FT4水平,。用純化的小鼠甲狀腺激素(FT4抗體包被微孔板,,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入甲狀腺激素(FT4再與HRP標(biāo)記的甲狀腺激素(FT4抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的游離甲狀腺激素(FT4呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠游離甲狀腺激素(FT4濃度,。
操作步驟:
1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,,在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,,然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻,;然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,,再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,,混勻;混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中,,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為12pmol/L,,8pmol/L ,,4pmol/L,2pmol/L,, 1pmol/L),。
2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同),、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用,。
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。
7.         溫育:操作同3。
8.         洗滌:操作同5,。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.     測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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