葡萄糖6磷酸脫氫酶Elisa試劑盒自備材料:
1. 蒸餾水,。
2. 加樣器:5ul,、10ul、50ul,、100ul,、200ul、500ul,、1000ul,。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
葡萄糖6磷酸脫氫酶Elisa試劑盒試劑的準(zhǔn)備:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗時準(zhǔn)備,,不能儲存,。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
500pg/ml (6號標(biāo)準(zhǔn)品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
250pg/ml (5號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
125pg/ml (4號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
62.5pg/ml (3號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
31.2pg/ml (2號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15.6pg/ml (1號標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0pg/ml (空白對照) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋,。
葡萄糖6磷酸脫氫酶Elisa試劑盒操作步驟:
1.使用前,,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。
3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育45分鐘,。
4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作4次,。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。
5.每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6.甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。
7.每孔加入底物A、B各50ul,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育5分鐘。避免光照,。
8.取出酶標(biāo)板,,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。
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