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大鼠促卵泡激素(FSH)酶聯(lián)免疫分析

閱讀:912      發(fā)布時間:2011-03-28
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大鼠促卵泡激素標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于-20保存,但應(yīng)避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

大鼠促卵泡激素操作步驟

1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

24 IU/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

12 IU/L

4號標準品

150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

6 IU/L

3號標準品

150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

3 IU/L

2號標準品

150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

1.5 IU/L

1號標準品

150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

 

2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同),、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。

3.         溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘,。  

4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復5次,拍干,。

6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3,。

8.         洗滌:操作同5,。

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色),。

11.     測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

 

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