人克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16)酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍: 96T
1.5ng/L - 48ng/L
使用目的:
本試劑盒用于測(cè)定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16)含量,。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16)水平。用純化的人克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16),再與HRP標(biāo)記的克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16)抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值),,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16)濃度。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標(biāo)準(zhǔn)品(96ng/L) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個(gè) |
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
48ng/L | 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
24ng/L | 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
12ng/L | 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
6ng/L | 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
3ng/L | 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同3,。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值),。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
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