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人克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16)酶聯(lián)免疫分析

閱讀:938      發(fā)布時(shí)間:2011-03-11
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人克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16)酶聯(lián)免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測(cè)范圍:                                                          96T

1.5ng/L - 48ng/L

 

使用目的:

本試劑盒用于測(cè)定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中克拉拉細(xì)胞蛋白cc16含量,。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16水平。用純化的克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16),再與HRP標(biāo)記的克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值),,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中克拉拉細(xì)胞蛋白(cc16濃度。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1

8

標(biāo)準(zhǔn)品(96ng/L

0.5ml×1

3

酶標(biāo)包被板

12孔×8

9

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2 

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1個(gè)

標(biāo)本要求

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于-20保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

操作步驟

1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

48ng/L

5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

24ng/L

4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

12ng/L

3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

6ng/L

2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3ng/L

1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 

 

2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻。

3.         溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘,。  

4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,,拍干,。

6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外,。

7.         溫育:操作同3,。

8.         洗滌:操作同5

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。

11.     測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值),。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

 

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