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本試劑盒用于測定豬血清,、血漿及相關液體樣本中傳染性胃腸炎抗體（TGE Ab）表達。

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中豬傳染性胃腸炎抗體（TGE Ab）表達,。用純化的豬傳染性胃腸炎 （TGE）抗原包被微孔板,，制成固相抗原，可與樣品中傳染性胃腸炎抗體（TGE Ab）相結合,，經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的傳染性胃腸炎 （TGE）抗原結合,，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，與CUTOFF值相比較,，從而判定標本中豬傳染性胃腸炎抗體（TGE Ab）的存在與否。

1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

1.         編號：將樣品對應微孔按序編號,，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔,、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）

 

 

2.         加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl,。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻，

3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。  

4.         配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.         洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干,。

6.         加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。

7.         溫育：操作同3,。

8.         洗滌：操作同5。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。

11.     測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

 

 

  試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

 臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

 陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為傳染性胃腸炎抗體（TGE Ab）陰性

 陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為傳染性胃腸炎抗體（TGE Ab）陽性

。

1．操作嚴格按照說明書進行,，本試劑不同批號組分不得混用,。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果,。

4． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

5．底物請避光保存,。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時,，參考波長為630nm

7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,，使用時必須注意安全,。

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6個月