支原體檢測試劑盒是利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測支原體污染,。這種染料會結(jié)合到 DNA 的 A-T 富集區(qū)域,，因為支原體的 DNA 中 A-T 含量高（55％～80％），所以可將其染色而被檢測到,。被支原體污染的細胞經(jīng)染色后在細胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點,，即為支原體的 DNA 染色斑，說明有支原體污染,。
Hoechst 33258 的大激發(fā)波長為 346nm,，大發(fā)射波長為 460nm；Hoechst 33258 和雙鏈 DNA 結(jié)合后,，大激發(fā)波長為 352nm,，大發(fā)射波長為 461nm。
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