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 驗試劑

裂解液（pH 8.5-9.0）：50 mM Tris-HCl,，2 mM EDTA, 100 mM NaCl,，0.5% Triton X-100，調(diào)pH值8.5-9.0備用,；

疏水性蛋白提取液（非裂解液）：1% Triton X-114，150mM NaCl, 10mM Tris-HCl,，1mM EDTA,，調(diào)pH值8.0備用。

   1） 自配裂解液（pH 8.5-9.0）：50 mM Tris-HCl,，2 mM EDTA, 100 mM NaCl,，0.5% Triton X-100，調(diào)pH值8.5-9.0備用,；用前加入100 μg/ml 溶菌酶,，1μl/ml 的蛋白酶抑制劑PMSF。該裂解液用量為10-50ml 裂解液/1g濕菌體,。

   4） 用含有0.3M鹽酸胍的95%乙醇洗滌。每1ml Trizol加入2ml洗液,，室溫放置20min,， 2-8℃下7500g離心5min，棄上清,，重復(fù)洗滌2次,。后加入2ml無水乙醇，渦旋后室溫放置20min,，2-8℃下7500g離心5min,，棄上清。

   4） 將上述上清中的Triton X-114含量增加到2%，再加入20mM的CaCl₂抑制部分蛋白酶活性,，37℃條件下放置10min使其分層,。室溫下1000g離心10min使液相和去污相充分分層。

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