中文名稱(chēng)：小鼠大型多功能肽酶7（LMP7）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

英文名稱(chēng)：Mouse Large Multifunctional Peptidase 7 （LMP7） ELISA Kit

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T

保存條件：2-8℃

有效期：6個(gè)月

標(biāo)本收集 注意事項(xiàng)：

1）在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定,。

2）我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè),，對(duì)收集后及時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。說(shuō)明：

樣品類(lèi)型： 標(biāo)本必須為液體,，不含沉淀,。包括血清、血漿,、尿液,、胸腹水、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清 或血漿,。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測(cè)種類(lèi),。樣品采集： 收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,，儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本， 將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存,。避免反復(fù)凍融,。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí)，-20℃可保存1個(gè)月,。-70度可保存6個(gè)月,。部分激素類(lèi)標(biāo)本需添加抑肽酶。四,、液體類(lèi)標(biāo)本：

包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等,。

1）血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。

3）尿液：

用無(wú)菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照此實(shí)行,。

4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

A、檢測(cè)分泌性的成份時(shí),，用無(wú)菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/ 分）。仔細(xì)收集上清,。

B,、檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右,。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并 放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

5）組織標(biāo)本：

切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用,。

人抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA（α-Fodrin IgG/IgA）Elisa試劑盒標(biāo)本要求

1．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

ELISA試劑盒操作步驟

方法一　用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:

1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml,。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃過(guò)夜。次日,，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘,。（簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌,，下同）。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃孵育1小時(shí),。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔,，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）,。

3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃孵育0.5～1小時(shí),，洗滌。

  4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃10～30分鐘,。

5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”,、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽(yáng)性。

方法二　用于檢測(cè)未知抗體的間接法：

用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml,，

每孔加0.1ml,，4℃過(guò)夜。次日洗滌3次,。

↓

加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。（同時(shí)做空白,、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）

↓

于反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘,，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌,。

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