超敏型CCK-8試劑盒（Ultra Cell Counting Kit-8）

產(chǎn)品描述

超敏型CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速,、高靈敏度的比色檢測(cè)試劑盒,。檢測(cè)原理為：WST-8在電子耦合劑1-Methoxy PMS存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜（formazan,，參考圖1),，生成的甲臜的顏色深淺與細(xì)胞增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比,。使用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定OD 值,，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

本試劑盒相較于基礎(chǔ)款CCK-8試劑盒,，靈敏度更高,，信號(hào)強(qiáng)度顯著提升，反應(yīng)迅速(多數(shù)細(xì)胞孵育30min左右出現(xiàn)明顯的顯色反應(yīng)),，線性范圍更寬,，能有效提升實(shí)驗(yàn)效率，適用于細(xì)胞增殖測(cè)定,，細(xì)胞毒性的檢測(cè),，藥物篩選，以及細(xì)胞生長(zhǎng)抑制檢測(cè)等,。

圖1：WST-8分子結(jié)構(gòu)及檢測(cè)原理

訂購(gòu)信息

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸,。4℃短期保存，有效期6個(gè)月,；-20℃長(zhǎng)期保存,，有效期24個(gè)月?！咀ⅰ浚悍磸?fù)凍融會(huì)造成測(cè)定背景OD值升高,。

超敏型CCK-8試劑盒（Ultra Cell Counting Kit-8）使用方法

1.       以96孔板為例，96孔板中每孔接種100 μL的細(xì)胞懸液,，在細(xì)胞培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24 h,。

2.       向每孔加入10 μL不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。如果僅測(cè)定細(xì)胞活性,，則不需要2~3步驟,，直接從第4步操作。

3.       將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（依據(jù)待測(cè)藥物而定）,。

4.       向每孔加入10 μL CCK-8溶液（注意不要產(chǎn)生氣泡,，輕輕混勻）。

5.       將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育適當(dāng)時(shí)間（一般0.5~1 h）。

6.       酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm處的吸光值,。

細(xì)胞活力計(jì)算

細(xì)胞存活率*（%）=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%

抑制率*（%）=[1-(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%

As: 實(shí)驗(yàn)孔吸光度(含細(xì)胞,、培養(yǎng)基、CCK-8 溶液和藥物溶液),；

Ac: 對(duì)照孔吸光度 (含細(xì)胞,、培養(yǎng)基、CCK-8 溶液,，不含藥物) ,；

Ab: 空白孔吸光度 (含培養(yǎng)基、CCK-8 溶液,，不含細(xì)胞,、藥物) 。

注意事項(xiàng)

1.       本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域。

2.       建議調(diào)試合適的接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8溶液后培養(yǎng)的時(shí)間,。當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96 孔板時(shí),，貼壁細(xì)胞至少1000 個(gè)/ 孔(100 μL 培養(yǎng)基)，白細(xì)胞至少2500 個(gè)/ 孔(100 μL 培養(yǎng)基),。建議實(shí)驗(yàn)前設(shè)定幾個(gè)不同細(xì)胞數(shù)量的梯度孔進(jìn)行條件測(cè)試,，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間和處理方法根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況而定，加入CCK-8溶液后（加入體積為每孔細(xì)胞培養(yǎng)液體積的10%）,，在37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育,，不同時(shí)間點(diǎn)后測(cè)450 nm處的吸光值(超敏型CCK-8試劑盒敏感性高，多數(shù)細(xì)胞在培養(yǎng)30分鐘左右即可肉眼觀察到明顯的顯色反應(yīng)),。

3.       如果吸光值很低，可以適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量或者延長(zhǎng)加入CCK-8溶液后孵育的時(shí)間,。

4.       CCK-8試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化反應(yīng),，如果待檢測(cè)體系中有較多還原劑（或抗氧化劑）會(huì)造成背景OD值升高，干擾檢測(cè)結(jié)果,。如果實(shí)驗(yàn)中有還原劑,，請(qǐng)檢查背景的OD值，設(shè)法先去除還原劑干擾,。例如,，可在加入CCK-8溶液之前更換新鮮的培養(yǎng)基，以去除待測(cè)藥物的影響,。當(dāng)待測(cè)藥物影響比較小時(shí),，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入待測(cè)藥物后的空白吸收即可。

5.       進(jìn)行藥物抑制實(shí)驗(yàn)時(shí),，如果藥物中含有金屬,，如Pb2+、Fe2+,、Cu2+等金屬會(huì)對(duì)CCK-8 Solution的顯色反應(yīng)產(chǎn)生影響,，從而導(dǎo)致檢測(cè)的靈敏度降低。

6.       如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng),，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化,，應(yīng)洗滌細(xì)胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8檢測(cè)。細(xì)胞培養(yǎng)基酚紅不影響測(cè)定結(jié)果,。

7.       為使CCK-8試劑盒培養(yǎng)基充分混勻,，減少CCK-8在移液器上的殘留，建議加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑,，混勻后加樣,。

8.       若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入0.1 M 的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,，室溫避光保存,，24 h 內(nèi)檢測(cè)，吸光度不會(huì)受到影響（加入1% SDS 溶液的體積與加入CCK-8溶液的體積相同）,。

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