BCA蛋白定量試劑盒有什么作用(附帶產(chǎn)品說明書)
BCA (Bicinchoninic acid) 法是目前應(yīng)用比較廣泛的蛋白質(zhì)濃度測定方法,?;陔p縮脲反應(yīng),即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將Cu2+還原成Cu+,,Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物,,在562 nm處有高的吸光值,該反應(yīng)產(chǎn)物的量與蛋白質(zhì)濃度成正比,。測定其在562 nm處的吸光值,,并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比,即可計(jì)算待測蛋白的濃度,。該方法快速靈敏,、穩(wěn)定可靠且對不同種類蛋白質(zhì)變異系數(shù)很小。試劑盒中提供了濃度穩(wěn)定的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
BCA蛋白定量試劑盒產(chǎn)品作用
準(zhǔn)確靈敏,,線性范圍廣:BCA 試劑的蛋白質(zhì)測定范圍是 10-2000μg/mL。
快速:45 分鐘內(nèi)完成測定,,比經(jīng)典的 Lowry 法快 4 倍而且更加方便,。
經(jīng)濟(jì)實(shí)用:在微孔板中進(jìn)行測定,可大大節(jié)約樣品和試劑用量,。
效果穩(wěn)定:不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響,,檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)。
BCA蛋白定量試劑盒使用說明
一,、配制標(biāo)準(zhǔn)品和工作液
1. 配制 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品體系(線性范圍 20-2000 μg/mL 或者 5-250μg /mL 標(biāo)準(zhǔn)品制備各 2 種配置方法,,請根
據(jù)習(xí)慣選用恰當(dāng)方式)。
2. 配制 BCA 工作液
(1) 計(jì)算所需要的總 BCA 工作液體積,???BCA 工作液體積=(標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量+待測樣品數(shù)量)x 重復(fù)數(shù) x 每個
樣品所需要的 BCA 工作液。
(2) 配制 BCA 工作液:50 體積的 BCA 試劑 A 中加入 1 體積的 BCA 試劑 B(A:B=50:1),,充分混勻,。
二、檢測方法
1. 試管檢測方法(樣品:BCA 工作液=1:20)
(1) 各取 100 μL 標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品加入到反應(yīng)管中,。
(2) 每管加入 2.0 mL BCA 工作液,,混勻。根據(jù)待測樣品的濃度范圍選擇孵育時(shí)間和溫度,。
標(biāo)準(zhǔn)孵育方法:37℃ 孵育 30 min 或者室溫 2h(檢測范圍:20-2000 μg/mL)
增強(qiáng)孵育方法:60℃ 孵育 30 min(檢測范圍:5-250 μg/mL)
(3) 冷卻到室溫,。在分光光度計(jì)上進(jìn)行檢測,設(shè)定波長為 562 nm,在 10 min 內(nèi)對所有樣品讀數(shù),。
(4) 根據(jù) BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度(減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的 OD 值即最終的讀數(shù)),,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(X-蛋白濃
度μg/mL;Y-最終的 OD 562nm),。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度,。
2. 微孔板檢測方法(樣品: BCA 工作液=1:20)
(1) 各取 10 μL 標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品加入到微孔板中。
(2) 每孔加入 200 μL BCA 工作液,,槍頭吹打充分混勻,。蓋上微孔板,37℃ 孵育 30 min,。
(3) 冷卻到室溫,,在酶標(biāo)儀上的 562 nm 波長范圍處檢測吸光度。
(4) 根據(jù) BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度(減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的 OD 值即最終的讀數(shù)),,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線( X-蛋白濃
度μg/mL,;Y-最終的 OD 562nm)。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度,。
BCA蛋白定量試劑盒注意事項(xiàng)
1,、為保證蛋白濃度測量的準(zhǔn)確性,最好做3個復(fù)孔,,必要時(shí)剔除離群值,。
2、BCA法測蛋白濃度易受時(shí)間及溫度的影響,,所以最好每次測定都做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
3、加樣時(shí)一定要準(zhǔn)確加樣且盡可能避免氣泡產(chǎn)生,,以免影響測量(加樣結(jié)束可以用注射器戳破氣泡,,并將96孔板放在搖床上混勻片刻,以使樣品與工作液充分接觸),。
4,、孵育結(jié)束應(yīng)盡快檢測吸光度,并盡可能加快檢測速度,,以免帶來誤差,。
5、確保所有試劑在使用前充分混合且在推薦的溫度下存儲,。試劑的新鮮度對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著影響,,過期或不當(dāng)存儲的試劑可能導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。
6,、在進(jìn)行BCA實(shí)驗(yàn)時(shí),,嚴(yán)格按照試劑添加順序和操作步驟進(jìn)行,,避免任何步驟的顛倒或省略。
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