CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針

產(chǎn)品描述

CFDA-SE分子式為C₂₉H₁₉NO₁₁，分子量為557.47,，CAS號為150347-59-4,，CFDA SE英文名是Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester,，CFDA-SE可用于細胞示蹤,，也可用于細胞增殖檢測。CFDA SE可以通過完好的細胞膜,，進入細胞后被細胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE,，CFSE可以隨機地(spontaneously)、不可逆地和細胞內(nèi)蛋白的賴氨酸殘基（Lysine）或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng),，并標記這些蛋白,。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時，即可充分標記細胞,。被CFDA SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩(wěn)定,，標記時間可達數(shù)個月。

CFDA, SE標記細胞呈綠色熒光,，檢測時的激發(fā)波長可以選擇488nm激發(fā),，發(fā)射波長為518nm，使用流式細胞儀檢測時可以采用FL1 檢測通道,。除了流式細胞儀檢測細胞增殖外,，還可用熒光酶標板定量活細胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察,。

CFDA-SE標記的分裂細胞每分裂一次,，子代細胞的熒光會減弱一半，這樣通過流式細胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細胞,，分裂一次的細胞熒光強度減半(1/2),，分離兩次的細胞熒光強度再減半(1/4)，以此類推,，熒光強度按照1/2,，1/4，1/8,，1/16的規(guī)律逐漸遞減。采用CFDA SE通過流式細胞儀檢測獲得的檢測結(jié)果每一個峰代表一種分裂次數(shù)的細胞,，從右至左的峰通常依次為分裂0次,、1次、2次,、3次等次數(shù)的細胞,。分裂次數(shù)較多后，分裂0次或1次等沒有分裂或分裂次數(shù)較少的細胞會逐漸減少直至檢測不到,。CFSA,，SE可檢測分裂次數(shù)多達八次甚至更多。經(jīng)CFDA, SE標記的細胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究,，且具有不會使鄰近細胞染色的功能,。CFDA, SE常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可用于成纖維細胞,，自然殺傷細胞,，造血祖細胞等其他細胞的增殖檢測。CFDA SE如果和其它熒光探針聯(lián)用,，可以獲取不同分裂次數(shù)細胞的其它相關(guān)信息,。我們的CFDA SE探針產(chǎn)品以25mg粉末包裝的形式提供。

運輸與保存方法

常溫運輸,，-20℃干燥避光保存，保質(zhì)期24個月,。避免反復(fù)多次凍融,。

使用方法

1.保存液配制（5mM）

按需配制,，如取DMSO 360μL,，溶解1mg CFSE，超音波溶解，得到5mM CFSE保存液,；將其按40μL體積分裝于避光的無菌凍存管中，-20℃可保存2個月,。

注意：CFSE遇水容易分解,，所以在配置時候要用無水DMSO，配置后計算用量盡快使用,，多余的立刻避光保存-20℃。DMSO是有機溶劑,，對于蛋白質(zhì)會有損傷，所以在配置的時候DMSO用量越少越好,；

2. 工作液配制

取5mM的CFSE稀釋液1 ul,，加入1ml 10％FCS 的PBS稀釋,。

3.染色

a.重懸細胞,。用有5％FCS的PBS重懸細胞，細胞濃度一般為1x1x10⁶/ml （體外實驗）或1x1x10⁷/ml（轉(zhuǎn)染實驗）,。

b.染色,。1ml DFSE工作液與1ml細胞懸液混合后37℃孵育5－10分鐘。期間輕輕混勻兩次（用手輕彈管壁,，切忌吹打）,。

c.終止染色。用*培養(yǎng)液洗滌3次并離心,。一般在第2次洗滌后再孵育5分鐘后進行第3次洗滌,。冰冷的含10 %新生牛血清RPMI1640（先加入1ml混勻 ，然后續(xù)加入7ml）, 輕輕混勻1min（用手輕彈,，切忌吹打）,1 500 r/ min 離心5 min,。

d.流式細胞儀在FL1通道檢測。