大鼠小腦顆粒原代細胞

大鼠小腦顆粒細胞分離自小腦皮層組織,；元是系統(tǒng)基本的結(jié)構(gòu)與功能單位,，小腦顆粒元是體積較小的元，直徑約10μm,，在中樞系統(tǒng)中含量非常豐富,，近乎元數(shù)量的一半。由于小腦元的生長,、分化和大腦皮層元相似,，而且數(shù)量多、便于取材,，因此小腦顆粒元是研究元生長發(fā)育,、軸突再生及疾病發(fā)生機制和臨床藥理的重要手段。小腦顆粒元是小腦主要的中間元,，在哺乳動物的小腦內(nèi)數(shù)量為豐富,。顆粒元的軸突與苔狀纖維和爬行纖維相聯(lián)系，形成小腦皮層內(nèi)的元環(huán)路,，在小腦的活動中起著非常重要的作用,。在動物傳染性海綿狀腦病中，病變可波及小腦顆粒元,，導致小腦皮層的元環(huán)路受損,，從而呈現(xiàn)性行為失調(diào)。研究小腦顆粒元在動物傳染性海綿狀腦病病理學變化中的反應,、病理發(fā)生的機理特別是分子機理,，有賴于小腦顆粒元細胞模型的建立。小腦顆粒細胞的軸突是沿冠狀軸分布的平行纖維,，正是這種排列保證了興奮的單向傳導,，這是小腦功能理論中的關鍵假設，小腦顆粒細胞通過g-氨基丁酸接受戈爾吉細胞的抑制性突觸的信息傳入,。

產(chǎn)品名稱：大鼠小腦顆粒細胞

組織來源：腦組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 元細胞樣

傳代特性 屬于終末分化細胞,；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠小腦顆粒采用消化法結(jié)合元專用培養(yǎng)基,、化學試劑抑制法篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠小腦顆粒經(jīng)NSE免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

大鼠載脂蛋白A5(APOA5)試劑盒 ,，英文名： APOA5 ELISA Kit

Mouse phosphatidylinositol aibody IgG/IgM (PI Ab-IgG/IgM) ELISA Kit 小鼠0脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)試劑盒

MouseMacrophageColony-StimulatingFactor,M-CSFELISAkit 小鼠巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanFibrinogenDegradationProduct,FDPELISAKit人血纖蛋白原降解產(chǎn)物

細胞/組織活性溶酶體分離試劑盒10次

ELISAKitMMP-2大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A

小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)Elisa 試劑盒 96T/48T

Rat macrophage inflammatory protein 3 alpha (MIP-3 alpha /CCL20) ELISA Kit 大鼠巨噬細胞性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)試劑盒

HumanFibrinogenlikepeptide2,fgl2ELISAKit 人纖維介素蛋白(fgl2)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanaldehydedehydrogenase,ALDH試劑盒人乙脫氫酶(ALDH)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物P型氫ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量試劑盒20次

Mouse6-keto-prostaglandin,6-K-PGELISAKit小鼠6同前列腺素(6-K-PG)試劑盒規(guī)格：96T/48T

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PVRL2重組人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 蛋白 (Fc 標簽) Protein

黏病毒耐藥蛋白1(MX1)重組蛋白 Recombinant Myxovirus Resistance 1 (MX1)

IFNA8重組人 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白 Protein

CRABP2 Protein Human 重組人 CRABP2 蛋白

HA Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

EFNA3 Protein Human 重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 / EFL2 蛋白 (Fc 標簽)  SW480(人結(jié)腸癌細胞)     小鼠子細胞;U14  CHO-K1倉鼠卵巢細胞亞株 CHO-K1 Chinese hamster ovary cell subline F-12K+10%FBS  ERN1 Others Human 小鼠原代頸靜脈內(nèi)皮細胞 大鼠原代腸肌成纖維細胞

大鼠小腦顆粒原代細胞ACE( ACE, testis-specific isoform precursor 0.5mgACE( ACE, testis-specific isoform precursor) 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(抗原)

DAPK1 Protein Human 重組人 DAPK1 / DAP Kinase 1 蛋白 (aa 1-363, His & GST 標簽)

SERPINA6重組小鼠 SerpinA6 / CBG 蛋白 Protein

LAMP1 Protein Rat 重組大鼠 LAMP1 / CD107a 蛋白 (Fc 標簽)

FKBP7重組人 PPIase / FKBP7 蛋白 (Fc 標簽) Protein