說到ELISA Kit,，信任大家都不會(huì)陌生。ELISA Kit的誕生,，是為了幫助科研作業(yè)者省掉繁瑣的試驗(yàn)過程,，進(jìn)步科研功率。假如選對(duì)了試劑盒,，用對(duì)了試驗(yàn)技巧,，就會(huì)讓您的試驗(yàn)功率事半功倍。

一.如何選購ELISA Kit 
市面上任意品牌的一個(gè)ELISA Kit售價(jià)都在1000元以上假如選錯(cuò)了試劑盒輕則丟失一筆科研經(jīng)費(fèi)重則毀掉整個(gè)試驗(yàn)課題所以選個(gè)對(duì)的,，很有必要,！市面上的ELISA Kit質(zhì)量良莠不齊，想要挑選到適宜的試劑盒還真不是一件很容易的事情,。真真假假,，難以區(qū)分。
1 查找待測(cè)樣本的蛋白濃度：能夠通過NCBI的文獻(xiàn),，uniprot,，pax-dab上給出的蛋白表達(dá)量參閱值來比較ELISA試劑盒中給出的樣本值與報(bào)道值是否一致；
2 試劑盒的應(yīng)用種屬,、檢測(cè)樣本的品種：除試劑盒特別闡明外,，一般不同種屬不能通用。常見待測(cè)樣本品種有：血清和血漿（不同抗凝劑）,，細(xì)胞上清,，和細(xì)胞裂解液，試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用；
3 試劑盒的檢測(cè)規(guī)模：也就是標(biāo)曲規(guī)別要注意待測(cè)樣本濃度是否落在標(biāo)曲規(guī)模內(nèi),，關(guān)于濃度很高的樣本,，能夠先進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再很多測(cè)定樣本。 
4 試劑盒中的稀釋線性及回收率：
a.稀釋線性一般指樣本稀釋線性,，是將樣本梯度稀釋下來,，看各稀釋梯度濃度是否成線性；參閱樣本稀釋線性能夠挑選樣本的稀釋倍數(shù),；
b.稀釋線性也有做加標(biāo)稀釋線性的情況,，加標(biāo)稀釋線性是將規(guī)范品參加樣本中測(cè)定參加的規(guī)范品濃度測(cè)定是否準(zhǔn)確；同樣也是斷定待測(cè)樣本稀釋倍數(shù)的參閱指標(biāo),。一般線性和回收率的規(guī)模在80%-120%比較適宜,； 
5 試劑盒的其它指標(biāo)：
a.靈敏度：試劑盒能夠檢測(cè)到的樣本低濃度的才干，假如待檢指標(biāo)含量很低,，需求挑選高靈敏度的ELISA試劑盒,；
b.板間和板內(nèi)的變異系數(shù)（CV%）:反映板內(nèi)和不同板之間是否均勻，CV%一般小于10% 比較好,。
6 試劑盒的有效期：試劑盒的有效期一般是半年至一年,，樣本準(zhǔn)備時(shí)刻需求考慮到試劑盒的有效期。

二.ELISA Kit 運(yùn)用技巧
選對(duì)ELISA Kit只是步要想獲得理想的試驗(yàn)成果還需掌握運(yùn)用技巧所以用對(duì)了,，才干事半功倍,！Bio-Swamp試劑盒團(tuán)隊(duì)，歷經(jīng)多年的實(shí)踐,，總結(jié)了ELISA Kit運(yùn)用技巧,，與您分享。
1 樣本的準(zhǔn)備：盡量運(yùn)用新鮮樣本,，不運(yùn)用有溶血,，被細(xì)菌污染、標(biāo)本保存時(shí)刻過長和標(biāo)本凝結(jié)不全的樣本,。ELISA檢測(cè)宜采集新鮮標(biāo)本,，如不能立即測(cè)定，5天之內(nèi)應(yīng)4℃保存,，關(guān)于1周后檢測(cè)的樣本應(yīng)低溫凍存,；做好分裝，長時(shí)刻凍存的樣本防止反復(fù)凍融,。
2 仔細(xì)閱讀闡明書,，了解整個(gè)流程，推薦畫出扼要步驟圖,；提早準(zhǔn)備試劑,，比如常見20X洗滌液是濃縮液,，需求用超純水提早稀釋準(zhǔn)備好。一般的檢測(cè)抗體和酶標(biāo)二抗需求用對(duì)應(yīng)的稀釋液稀釋至作業(yè)濃度,。
3 不同批次的試劑不要混用,，查看各組分的有效期。
4 預(yù)包被的酶標(biāo)板條和各試劑組份需求室溫平衡30 min以上,，這樣做的意圖能使反響微孔內(nèi)的溫度較快地到達(dá)所需溫度，預(yù)防后續(xù)試驗(yàn)中由于孵育溫度或是時(shí)刻不行充沛,，而將一些弱陽性樣本不能檢出,。
5 待測(cè)樣本加樣：待檢樣本過多時(shí)，建議分批操作,；需求稀釋的樣本提早做好稀釋,，注意選對(duì)適宜稀釋液；控制好加樣時(shí)刻,，防止加樣費(fèi)時(shí)過長造成誤差,；注意加樣視點(diǎn)，垂直參加孔底,，不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個(gè)移液頭,，防止交叉污染。 
6 溫育和洗板：溫育時(shí)刻和溫度一般根據(jù)試劑盒的闡明書進(jìn)行挑選,。溫育時(shí)能夠選用水浴或許濕盒孵育,防止“邊緣效應(yīng)”,。①手工洗板時(shí)，拍板時(shí)要垂直,，防止交叉污染,，用力不能過猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離,；②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常查看沖洗頭是否通暢,。
7 顯色：市售ELISA 試劑盒中，一般是以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的顯色液,，反響條件為37℃或室溫反響15～30 min,。顯色反響需求避光。
8 讀數(shù)和數(shù)據(jù)剖析：停止后讀取成果盡量在15min內(nèi)完成,，讀取OD值時(shí)酶標(biāo)儀需先預(yù)熱15～30 min再進(jìn)行,。數(shù)據(jù)剖析一般用四參數(shù)和直線擬合法，挑選哪種擬合方式,，能夠根據(jù)標(biāo)曲的相關(guān)系數(shù)（R2）來斷定,，R2一般需求大于0.99。