大鼠食管成纖維原代細(xì)胞

大鼠食管成纖維細(xì)胞分離自食管組織,；食管是咽和胃之間的消化管，食管在系統(tǒng)發(fā)生上起初很短,，隨著頸部的伸長(zhǎng)和心肺的下降,，而逐漸增長(zhǎng)。食管可分為頸段,、胸段和腹段。脊椎動(dòng)物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端,，胸段位于左,、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過(guò)膈孔與腹腔內(nèi)腹相連,，腹段很短與胃相連,。在發(fā)育過(guò)程中，食管的上皮細(xì)胞增殖,，由單層變?yōu)閺?fù)層,，食管使管腔變狹窄，甚至一度閉鎖,，以后管腔又重新出現(xiàn),。哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層,、肌層和外膜,。其中，黏膜層,，包括上皮,、固有層和黏膜肌層,。食管的外膜，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成,，富有血管,、淋巴管及神經(jīng)。主要包含食管成纖維細(xì)胞,，成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大,，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開(kāi)始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長(zhǎng),，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng),，平坦,、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大,，呈橢圓形,，顏色淡。細(xì)胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠食管成纖維細(xì)胞

組織來(lái)源：食管

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，含FBS,、bFGF、Insulin,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

大鼠食管成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠食管成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠食管成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3(TGFβ3)試劑盒 ,，英文名： TGFβ3 ELISA Kit

Mouse ai cardiolipin aibody IgG (ACA-IgG) ELISA Kit 小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)試劑盒

Mousekeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit 小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanLactoferrin,LTF/LFELISAkit人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白

微粒體S轉(zhuǎn)移酶(GSHST)活性比色法定量試劑盒20次

大鼠抗IVIgG抗體ELISAKit大鼠抗IVIgG抗體ELISAKit,，大鼠抗IVIgG抗體ELISAKit，

抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)重組蛋白 Recombinant Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA)

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, Fc 標(biāo)簽)

CA9重組人 Carbonic Anhydrase IX / CA9 蛋白  Protein

HA Protein H7N2 重組甲型流感 H7N2 (A/ruddy turnstone/New Jersey/563/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽)

IL17A重組人 IL17 / IL17A 蛋白 Protein

兔血管生成素2試劑盒   兔血管生成素2試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔血管生成素2試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔血管生成素2試劑盒,、兔血管生成素2 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月,。

兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1試劑盒   兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1試劑盒、兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月,。

兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒   兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒,、兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月,。

兔血管緊張素Ⅱ試劑盒   兔血管緊張素Ⅱ試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔血管緊張素Ⅱ試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來(lái)源：試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：兔血管緊張素Ⅱ試劑盒、兔血管緊張素Ⅱ 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月,。

CD80重組小鼠 CD80 / B7-1 / CD28LG 蛋白 Protein

CD8a分子(CD8a)重組蛋白 Recombinant Cluster Of Differentiation 8a (CD8a)

ORM2重組人 ORM2 蛋白 Protein

CSNK1A1 Protein Human 重組人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

MMP9 Protein Rat 重組大鼠 MMP-9 / CLG4B 蛋白

CSSTL1 中華鱉肺來(lái)源細(xì)胞  小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-D2 III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL  IL21 Others Rat 大鼠 IL21 / Ierleukin 21 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液   MET Others Rat 小鼠原代前列腺成纖維細(xì)胞 兔原代胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

大鼠食管成纖維原代細(xì)胞乙酰羧化酶α(ACACα)重組蛋白 Recombinant Acetyl Coenzyme A Carboxylase Alpha (ACACa)

HAVCR1 Protein Human 重組人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

MCAM重組人 CD146 / MCAM 蛋白 Protein

GST Protein Schistosoma japonicum 重組日本血吸蟲(chóng) Glutathione S-transferase / GST 蛋白

HA重組甲型流感 H1N1 (A/WSN/1933) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi),；

1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。