大鼠腎小管上皮原代細(xì)胞

大鼠腎小管上皮細(xì)胞分離自腎組織；腎臟是機(jī)體的重要器官,，它的基本功能是生成尿液,，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物,，同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì),，如葡萄糖、蛋白質(zhì),、氨基酸,、鈉離子、鉀離子,、等,，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡,。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能,，生成腎素、促紅細(xì)胞生成素,、活性維生素D3,、前列腺素、激肽等，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場(chǎng)所和腎外激素的靶器官,。腎臟的這些功能,，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進(jìn)行,。腎小管是機(jī)體腎臟器官上與腎小囊壁層相連的一條細(xì)長(zhǎng)上皮性小管,，具有重吸收（reabsorption）和排泌作用。腎小管按不同的形態(tài)結(jié)構(gòu),、分布位置和功能分成近端小管,、髓袢和遠(yuǎn)端小管三部分；近端小管可分為直部和曲部,，曲部也稱(chēng)為近曲小管,，位于皮質(zhì)迷路內(nèi)，于腎小體附近高度蟠曲,；遠(yuǎn)端小管曲部也稱(chēng)為遠(yuǎn)曲小管,，位于皮質(zhì)迷路內(nèi)。腎小管上皮細(xì)胞是腎小管外面的一層細(xì)胞,，腎小管上皮細(xì)胞的分離,、培養(yǎng)是研究腎臟疾病的一項(xiàng)重要技術(shù)，目前該細(xì)胞分離方法有酶分離法,、化學(xué)分離法篩網(wǎng)分離法,、顯微解剖分離法、流式細(xì)胞儀分離法等,。腎小管上皮細(xì)胞主要功能：①腎小管上皮細(xì)胞重吸收原尿中幾乎全部的葡萄糖和氨基酸,；②排泌非營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入終尿；③細(xì)胞能分泌炎癥介質(zhì)如細(xì)胞因子和趨化因子,，通過(guò)產(chǎn)生IL-8或直接趨化白細(xì)胞參與急性炎癥反應(yīng),；④移植腎炎癥和新月體腎炎中PTEpiC表達(dá)IL-2R和MHC-Ⅱ類(lèi)抗原，這說(shuō)明腎小管上皮細(xì)胞參與腎免疫損傷的發(fā)生,。隨著對(duì)腎間質(zhì)纖維化機(jī)制研究的日漸加深,，腎小管上皮細(xì)胞（RTECs）在其中的作用日益被人們重視。因此,，提供良好的腎小管上皮細(xì)胞模型,，在腎小管間質(zhì)疾病的發(fā)病機(jī)制和治療藥物篩選的研究中是非常重要的。

產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠腎小管上皮細(xì)胞

組織來(lái)源：腎組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2,，5%

方法簡(jiǎn)介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎小管上皮采用先機(jī)械研磨過(guò)不銹鋼網(wǎng)篩分離得到腎小管、后用膠原酶消化,，結(jié)合上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎小管上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。

大鼠轉(zhuǎn)縮酶(TALDO1)試劑盒 ，英文名： TALDO1 ELISA Kit

Mice of aithrombin III (AT- III) aibody ELISA Kit 小鼠抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)試劑盒

Mousemajorhistocompatibilitycomplex-Ⅱ,MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISAKit 小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(lèi)(MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanLeukemiainhibitoryfactor,LIFELISAkit人白血病抑制因子

氨基酸補(bǔ)充溶液(10X)100毫升

ELISAKitATGA/TGAB大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體

小鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat myeloperoxidase specificity of ai neuophil cytoplasmic aibody IgG (MPO-ANCA IgG)ELISA Kit 大鼠髓過(guò)氧化物酶特異性抗粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)試劑盒

Humanleoopichormone,LHELISAKit (LH)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanClaracellprotein,CC16試劑盒人克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組蛋白脫乙?；?span>(HDAC)總活性比色法定量試劑盒20次

Humaotavirusaigen,，RVAgELISAKit人輪狀病毒抗原(RVAg)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠酶(CA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠胃動(dòng)素(MTL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

CA9重組人 Carbonic Anhydrase IX / CA9 蛋白  Protein

抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)重組蛋白 Recombinant Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA)

IL17A重組人 IL17 / IL17A 蛋白 Protein

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 Arg, Fc 標(biāo)簽)

HA Protein H7N2 重組甲型流感 H7N2 (A/ruddy turnstone/New Jersey/563/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CSF2 Others Rat 大鼠 GM-CSF / CSF2 人細(xì)胞裂解液   96-C細(xì)胞，低轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞 人前列腺癌細(xì)胞,PC-3細(xì)胞 人膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞總RNAHBdSF NA  CL-0161MRC-5(人胚肺成纖維細(xì)胞 ) 小鼠原代乳腺上皮細(xì)胞 人原代頸動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

大鼠腎小管上皮原代細(xì)胞Beta-Amyloid(1-40 0.1mgBeta-Amyloid(1-40) β淀粉樣肽(1-40)(多肽蛋白)

HDAC3 Protein Human 重組人 HDAC3 / Histone deacetylase 3 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

JAM3重組小鼠 JAM3 / JAM-C 蛋白 Protein

ICOS Protein Rat 重組大鼠 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

DCX重組人 DCX 蛋白 (aa 45-150, GST 標(biāo)簽) Protein

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi),；

1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。