大鼠顱蓋造骨原代細胞

大鼠顱蓋造骨細胞分離自顱骨組織；造骨細胞（osteoblast）亦稱成骨細胞,。是參與骨組織形成的細胞,。顱骨位于脊柱上方，由23塊形狀和大小不同的扁骨和不規(guī)則骨組成,。除下頜骨及舌骨外,，其余各骨彼此借縫或軟骨牢固連結,，起著保護和支持腦、感覺器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用,。顱分腦顱和面顱兩部分,。腦顱位于顱的后上部，內(nèi)有顱腔,，容納腦,，共8塊。面顱為顱的前下部分,，包含眶,、鼻腔、口腔等結構,，構成面部的支架,，共15塊。成骨細胞是骨形成的主要功能細胞,，負責骨基質的合成,、分泌和礦化。骨不斷地進行著重建,，骨重建過程包括破骨細胞貼附在舊骨區(qū)域,，分泌酸性物質溶解礦物質，分泌蛋白酶消化骨基質,，形成骨吸收陷窩,；其后，成骨細胞移行至被吸收部位,，分泌骨基質,，骨基質礦化而形成新骨,；破骨與成骨過程的平衡是維持正常骨量的關鍵,。成骨細胞培養(yǎng)不僅有助于了解骨形成機制、骨骼系統(tǒng)疾病的分子和細胞學基礎,，也是藥物篩選,、生物材料開發(fā)和生物工程研究的重要手段。

產(chǎn)品名稱：大鼠顱蓋造骨細胞

組織來源：顱骨

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件：

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：梭形,、多角形

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

大鼠顱蓋造骨細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡介

實驗室分離的大鼠顱蓋造骨采用膠原酶消化法制備而來制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的大鼠顱蓋造骨經(jīng)ALP染色檢測,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。

3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存,。

兔子免疫球蛋白M(IgM)ELISA 試劑盒

People leils binding type AFP / AFP Varia 3 (AFP-L3) ELISA kit E 人小扁結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體3(AFP-L3)試劑盒E

Humanimmunoglobulinheavychain,IgHELISAKit 重鏈(IgH)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanE1/ubiquitin-activatingenzyme,E1/UBAE試劑盒人泛素激活酶(E1/UBAE)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織PAK1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

humanperoxisomeproliferativeactivatedreceptorgamacoactivator1alpha,PPARGC1ELISAKit人過氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)試劑盒規(guī)格：96T/48T

豚鼠甘露聚糖結合凝集素關聯(lián)絲酸蛋白酶1(MASP1)試劑盒 ,，英文名： MASP1 ELISA Kit

Human calnexin (calnexin) ELISA Kit 人鈣聯(lián)蛋白(calnexin)試劑盒

rabbitCoicosterone,COELISAKit 兔子皮質酮/腎上腺酮(CO)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforB7-2/sCD86(MousesolubleClusterofdiffereiation86)ELISAKit小鼠可溶性CD86

線蟲甲磺酸乙脂(EMS)誘導突變試劑盒10次

RabbitBcl-2AssaciatedXprotein,BAXELISAKit兔Bcl-2相關X蛋白(BAX)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人粘蛋白21(MUC21)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human MUC21 (Mucin 21) ELISA Kit

人伴侶蛋白10(CPN10)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human CPN10 (Chaperonin 10) ELISA Kit

人趨化素(CHEM)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human CHEM(Chemerin) ELISA Kit

人趨化因子C-C-基元配體1(CCL1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human CCL1 (Chemokine C-C-Motif Ligand 1) ELISA Kit

FCGR3重組小鼠 CD16 / FCGR3 蛋白 Protein

Akt/PKC(Protein Kinase C,PKC 0.5mgAkt/PKC(Protein Kinase C,PKC) 蛋白激酶C(多肽抗原)

CD1B重組人 CD1B / CD1A 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CD46 Protein Human 重組人 CD46 蛋白

CD79B Protein Rat 重組大鼠 CD79B / B29 蛋白 (Fc 標簽)

CFR Others Rat 大鼠 CFR / CFR-alpha 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液   LGMN Others Sus scrofa (Pig) 野豬 (Pig) Legumain / LGMN / AEP 人細胞裂解液 大鼠雪旺細胞 Rattus 小鼠原代嗅鞘細胞 兔原代子宮內(nèi)膜間質細胞

大鼠顱蓋造骨原代細胞泛素(Ub)重組蛋白 Recombinant Ubiquitin (Ub)

CDK16 Protein Human 重組人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 標簽)

PTPN11重組小鼠 SHP2 / PTPN11 蛋白 Protein

EFNA5 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白

PRKAR1A重組人 PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 蛋白 Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。