大鼠虹膜色素上皮原代細(xì)胞

大鼠虹膜色素上皮細(xì)胞分離自眼球虹膜組織；虹膜是眼睛構(gòu)造的一部分,，屬于眼球中層,，位于血管膜的最前部；在睫狀體前方虹膜,，中心有一圓形開口,，稱為瞳孔，猶如相機(jī)當(dāng)中可調(diào)整大小的光圈,，內(nèi)含色素決定眼睛的顏色,。日間光線較為強(qiáng)烈時，虹膜會收蹜,，只使一小束光線穿透瞳孔,，進(jìn)入眼睛；當(dāng)進(jìn)入黑暗環(huán)境中,，虹膜就會往后退縮,，使瞳孔變大，讓更多的光線進(jìn)入眼睛,，多數(shù)的脊椎動物的眼睛都有虹膜,。虹膜色素上皮細(xì)胞（IPE）是虹膜重要結(jié)構(gòu)組成細(xì)胞之一，位于虹膜組織的后面,，和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（RPE）同樣起源于神經(jīng)外胚葉層,，可能具有相似的生物學(xué)功能，因此對IPE的研究將為防治因RPE結(jié)構(gòu)或功能異常而導(dǎo)致的眼底病提供新思路,。

產(chǎn)品名稱：大鼠虹膜色素上皮細(xì)胞

組織來源：眼球

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

方法簡介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠虹膜色素上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠虹膜色素上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

小鼠αN已酰基葡糖苷酶(αNAG)ELISA 試劑盒

Rat aquaporin 3 (AQP-3) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白3(AQP-3)試劑盒

Humanplacealactogen,HPLELISAKit 人胎盤催乳素(HPL)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanChromogranin,CgA試劑盒人嗜鉻蛋白A(CgA)試劑盒

總脂肪酶(lipase)定量試劑盒50次

Humansalivaryductaoaibody,SDAELISAKit人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體(SDA)試劑盒

魚脫酶1(DIO1)ELISA試劑盒 ELISA 組裝/原裝

Human ai thyroid peroxidase aibody (TPO-Ab) ELISA Kit 人抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)試劑盒

PorcineSolubleIercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1ELISAKit 豬可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)試劑盒 進(jìn)口分裝

ADVIgGIII腺病毒IgGⅢ型(間接法二步法)

血液乙醇脫氫酶III(谷胱苷肽-依賴性甲脫氫酶)活性比色法定量試劑盒20次

MouseSolubleEndoglin,ENG/sCD105ELISAKit小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)試劑盒

脂肪酸合成酶（FAS）測試盒   紫外分光光度法   50管/48樣

蔗糖0酸化酶(SP)測試盒   紫外分光光度法   50管/48樣

硫氧還蛋白氧化還原酶（xR）測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

還原酶（GR）測試盒   紫外分光光度法   50管/48樣

CXCL13重組食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白 Protein

Morphine/BSA 與牛血清白蛋白偶聯(lián)物 10mgMorphine/BSA 與牛血清白蛋白偶聯(lián)物

DAPK3重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

IL17A Protein Human 重組人 IL17 / IL17A 蛋白

PREP Protein Mouse 重組小鼠 Prolyl endopeptidase / PREP 蛋白

CA1 Others Human 人 CA1 人細(xì)胞裂解液   小鼠上皮細(xì)胞   食管上皮細(xì)胞Many   子宮成纖維細(xì)胞Many   中國倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1  DCS 小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤細(xì)胞 小鼠原代子宮內(nèi)膜干細(xì)胞 人原代內(nèi)皮祖細(xì)胞

大鼠虹膜色素上皮原代細(xì)胞CD14(cluster of differentiation antigen 14 0.5mgCD14(cluster of differentiation antigen 14) CD14/內(nèi)毒素受體抗原

ACYP2 Protein Human 重組人 ACYP2 / Acylphosphatase-2 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

REN重組小鼠 REN1 / Renin-1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

SERPINE1 Protein Rat 重組大鼠 SerpinE1 / PAI-1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

NAMPT重組人 PBEF / Visfatin / NAMPT 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。