EndoFree Plasmid Maxi Kit

彩色無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒

彩色無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒 核酸提取

目錄號(hào)：31115-10

產(chǎn)品內(nèi)容：

保存條件：

在室溫(15 ~ 25℃)干燥條件下,，可保存 12 個(gè)月。

RNase  A,，可常溫運(yùn)輸,，-20℃保存。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑盒用于無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 的大量制備,，柱上去除內(nèi)毒素,，操作簡(jiǎn)單。菌體經(jīng)改良的堿裂解處理,，質(zhì)?？蓮木w中釋放出來(lái)，并特異,、高效地被離心柱硅膠膜吸附,。通過(guò)去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他雜質(zhì)，最后得到高純度的無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA,，所得質(zhì)?？芍苯佑糜趍ei切、轉(zhuǎn)化,、PCR,、測(cè)序,、細(xì)胞轉(zhuǎn)染等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

小質(zhì)粒（<10kb）,，拷貝數(shù)高,，100ml 菌液通常能提到 500-1500ug 質(zhì)粒；大質(zhì)粒（>10kb）,，拷貝數(shù)低,，200ml 菌液通常能提到 200-600ug 質(zhì)粒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.        du特工藝配方清除內(nèi)毒素,，內(nèi)毒素含量極低（< 1 EU/ug DNA）,，細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果ji佳。

2.        得率高： 150 – 300 ml 菌液可提出多達(dá) 500– 2000 ug 的純凈質(zhì)粒,；

重要提示：

一,、使用前檢查 Solution II 和 Solution N3 是否出現(xiàn)沉淀，如有沉淀 37℃加熱溶解后再用,。

二,、首ci使用前，請(qǐng)先在 Buffer WB2 中加入無(wú)水乙chun（詳見(jiàn)瓶身標(biāo)簽）,，混勻,，并做好標(biāo)記。

三,、首ci使用請(qǐng)先將 RNase A 全部加到 Solution I 中,，混勻，每次使用后置于 2 ~ 8℃保存,。

操作步驟：

1.   柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 2.5 ml 的Buffer BL,，10,000 rpm 離心 2 min，棄收集管中濾液,，將吸附柱重新放回收集管中,。

2. 取 100 ~ 150 ml（最多 200 ml）過(guò)夜培養(yǎng)的菌液，室溫 10,000 rpm 離心 2 min,，棄上清,，收集菌體。

（注意： 如果菌液濃度高,，收集 100ml 的菌體即可,菌液濃度低,，收集 150-200ml 菌液。）

3.加入 10 ml Solution I,，重懸菌體沉淀,，渦旋震蕩至che底懸浮，呈現(xiàn)出均勻渾濁的棕紅色。

（注意：如有未che底懸浮的菌塊會(huì)影響裂解,，導(dǎo)致提取的質(zhì)粒濃度及純度降低）

4.加入 10 ml Solution II,，顛倒混勻使菌體wan全裂解，直到溶液變清亮,、粘稠的紫紅色,。

（注意：不可 Votex 劇烈震蕩，以免造成基因組 DNA 片段的污染,，所用時(shí)間不要超過(guò) 5 min,，以免質(zhì)粒受到破壞，如未wan全變得清亮,，可能是菌體太多,，可增加 Solution II 的用量，在后續(xù)的操作中 Solution N3 的用量也要相應(yīng)增加）

5.加入 10 ml Solution N3,，立即溫和顛倒混勻,，可見(jiàn)紅黃相間的絮狀物產(chǎn)生，繼續(xù)混勻直

到wan全變?yōu)辄S色,，靜置 2 min,，然后室溫 10,000 rpm 離心 10 min，小心取上清至新管,。

（注意：離心后在最上層可能會(huì)出現(xiàn)一層漂浮膜,，注意不要倒入吸附柱）

6.   加入 0.3 倍濾液體積的異丙chun，上下顛倒混勻,。分兩次（每次不超過(guò) 10 ml）轉(zhuǎn)入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），10,000 rpm 離心 1 min,，質(zhì)粒被吸附在膜上,，棄濾液，直到所有混合溶液通過(guò)此吸附柱,。

7.    向吸附柱中加入 5 ml ToxinOut Buffer,，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄濾液,。

8.加入 10 ml Buffer WB2,，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄濾液,。

（注意：Buffer WB2 為濃縮液,，按要求加入無(wú)水乙chun，用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋,，以防酒精揮發(fā)）

9.加入 5 ml Buffer WB2,，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

10.  將吸附柱放進(jìn)收集管,，室溫 10,000 rpm 離心 5 min,，甩干膜上殘留乙chun。

11.  將吸附柱置于一個(gè)新的 50 ml 離心管（自備）中,，打開(kāi)管蓋,，室溫晾干 5 min，以免殘留乙chun影響下游應(yīng)用,。

12.  加入 1 ~ 2 ml 的洗脫液Buffer EB,，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心 2 min,，離心管底溶液即質(zhì)粒 DNA,。

（注意：事先在 65~70℃水浴中預(yù)熱洗脫緩沖液 EB，可增加洗脫效率,；

如果需要較多量質(zhì)粒,，可將得到的質(zhì)粒溶液重新加入吸附柱中，重復(fù)收集 3 次,，可獲得最大洗脫率,；如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調(diào)整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之間,。）

彩色無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒 核酸提取