諾博萊德West Femto ECL超敏發(fā)光液,West Femto ECL Substrate

West Femto ECL超敏發(fā)光液 顯色與信號(hào)檢測(cè)

產(chǎn)品貨號(hào)：PE8818

產(chǎn)品名稱：West Femto ECL超敏發(fā)光液,West Femto ECL Substrate

產(chǎn)品規(guī)格：2*12.5ml / 2*50ml

產(chǎn)品簡介：

英文名稱：West Femto ECL Substrate

中文名稱：West Femto ECL超敏發(fā)光液

規(guī)格：2*12.5ml ; 2*50ml

純度：＞99%

儲(chǔ)存條件：2-8℃,，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品介紹：

NobleRyder PE8818 West Femto ECL超敏發(fā)光液,West Femto ECL Substrate用于檢測(cè)直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。由于采用了du特的發(fā)光底物系統(tǒng),，West Femto ECL超敏發(fā)光液是目前zui靈敏的商業(yè)化熒光ECL檢測(cè)試劑：
(1) 具有ji高靈敏度和高信噪比,，可檢測(cè)10～100 fg抗原;
(2) 可在日光燈下進(jìn)行發(fā)光操作;
(3) 發(fā)光迅速，熒光可使X光膠片感光達(dá)12小時(shí)以上,，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測(cè);
(4) 可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000～1:10000),，極其節(jié)省抗體。
2. 用途：用于HRP標(biāo)記抗體的Western Blot和HRP標(biāo)記探針的核酸雜交,。
3. 使用方法:
(1)執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE,、轉(zhuǎn)膜和Western Blot步驟。注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗-鏈親和素-生wu素-HRP夾法,。
(2)Western Blot最后一次洗膜的同時(shí)新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液A和B,，放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液,，室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有降低,。
(3)用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜wan全干燥,。將膜wan全浸入發(fā)光工作液(0.125mL發(fā)光工作液/cm2膜)中，與發(fā)光工作液充分接觸,。室溫孵育3分鐘,，準(zhǔn)備立即壓片曝光。孵育時(shí)間過長不會(huì)增加靈敏度,，有時(shí)還會(huì)導(dǎo)致曝光條帶異常,。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進(jìn)行,，也會(huì)導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度,。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。
(4)用鑷子夾起膜,，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液,。但勿洗去發(fā)光液。
(5)打開X光膠片暗盒，在暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜,。將Western Blot膜貼在保鮮膜上,，將保鮮膜折起來wan全包裹Western Blot膜，去除氣泡和皺褶,，可剪去邊緣部多余的保鮮膜,。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋Western Blot膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi),，蛋白帶面向上,。
(6)暗房內(nèi)壓X光膠片，分別曝光不同的時(shí)間如數(shù)秒到數(shù)分鐘,。顯影沖洗,。
4. 儲(chǔ)存：4  ℃密封避光保存一年以上。短期可放置室溫,。
5. 安全性：無特殊毒性,，按普通化學(xué)品處理。
6. 注意事項(xiàng)：
(1)步驟1～5可在日光燈下操作;但發(fā)光液曝露于強(qiáng)光下時(shí)間過久靈敏度可能略有降低,，移到暗房操作可避免之,。戴手套可以避免在膜上留下手印。
(2)長時(shí)間曝光或蛋白過量,，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系,。曝光不足則條帶模糊。
(3)發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光,。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見,，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時(shí)間,。肉眼不可見的熒光實(shí)際上可持續(xù)數(shù)小時(shí)并使X光膠片感光,，因而弱帶可曝光1-10小時(shí)。如果曝光后條帶不佳,，可用洗膜緩沖液洗膜,，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光,。
(4)由于超敏發(fā)光液極其靈敏,，強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗1:1000～1:4000，二抗1:2000～1:5000,?？贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導(dǎo)致失敗,。
(5)某些保鮮膜包裹印跡膜時(shí)可能會(huì)淬滅熒光,，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜,。
(6)使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。

(7)NaN3能抑制HRP活性,，回收第二抗體應(yīng)避免使用NaN3,，如必需使用勿超過0.01%。

 備注：產(chǎn)品信息可能會(huì)有優(yōu)化升級(jí),。請(qǐng)以實(shí)際標(biāo)簽信息為準(zhǔn),。    

操作概述：

注：優(yōu)化抗原和抗體的濃度。必須使用建議的抗體稀釋度,，以保證陽性結(jié)果,。有關(guān)建議的稀釋度范圍請(qǐng)參考其他所需材料。

1) 將一抗?jié)舛认♂尩?1ng 至 0.2 μg/mL（以 1 μg/mL 儲(chǔ)存液稀釋 1:5,000 至 1:100,000 倍）

2) 將二抗?jié)舛认♂尩?2ng 至 10 ng/mL（以 1 μg/mL 儲(chǔ)存液稀釋 1:100,000 至 1:500,000 倍）

3) 將兩種底物組份按 1:1 比例混合,，制備底物工作液,。注：暴漏于日光或任何其他強(qiáng)光可能損害工作液，為獲得最佳結(jié)果,，將此工作液保存在琥珀色瓶中,， 并避免長期暴漏于任何強(qiáng)光。短時(shí)間暴漏于實(shí)驗(yàn)室常規(guī)照明不會(huì)損害該工作液,。

4) 將印跡膜在 West Femto ECL 底物工作液中孵育 5 分鐘,。

5) 吸出多余試劑。用清潔的塑料膜蓋住該印跡膜,。

6) 使印跡膜在 X 光膠片上曝光

蛋白印跡法詳細(xì)操作步驟

1) 將印記膜從蛋白轉(zhuǎn)印設(shè)備中取出,，加入合適的封閉液在溫室下孵育 20-60 分鐘，同時(shí)振蕩,。以 封閉膜上非特異性蛋白結(jié)合位點(diǎn),。 請(qǐng)注意：使用在前文建議的抗體稀釋度是非常重要的。

2) 將膜從封閉液中取出,，與一抗工作液在溫室孵育 1 小時(shí),，同時(shí)振蕩；或在 28℃孵育過夜,，不振蕩,。

3) 將足量的洗滌緩沖液加至膜上，保證緩沖液將膜wan全覆蓋,。振蕩孵育≥5 分鐘，更換洗滌緩沖液 并重復(fù)該步驟 4-6 次,。增加洗滌緩沖液體積,，洗滌次數(shù)和洗滌時(shí)間有助于降低背景信號(hào)。

注：孵育前,，膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會(huì)提高洗滌效率,。 請(qǐng)注意：使用在前文建議的 HRP 標(biāo)記二抗稀釋度是非常重要的,。

4) 將 HRP 標(biāo)記的二抗工作液與膜在溫室孵育 1 小時(shí)，同時(shí)振蕩,。

5) 重復(fù)步驟 3,，以除去未結(jié)合的 HRP 標(biāo)記二抗。

注：膜與 HRP 標(biāo)記二抗孵育后必須進(jìn)行che底洗滌,。

6) 將 A 溶液與 B 液等比例混合,，制備成工作液。每 cm2膜使用 0.01～0.1ml 工作液,。工作液可以 在溫室下穩(wěn)定 8 小時(shí),。

注：暴漏雨日光或任何其他強(qiáng)光下可能損害工作液，為獲得嘴角結(jié)果,，將此工作液保存在琥珀色瓶中,，并避免長期暴漏雨任何強(qiáng)光。實(shí)驗(yàn)室的常見照明不會(huì)損害工作液,。

7) 將印記膜在工作液中孵育 5 分鐘,。

8) 從工作液中取出印記膜，并置于一個(gè)塑料片或清潔的塑料紙（膜）中,，用一張吸水紙吸除多余的液體,，并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡。

9) 將包在塑料紙（膜）中的印記膜置于膠片暗盒中,，蛋白質(zhì)面朝上,，除適用于膠片曝光的燈（如紅色安全燈）之外，關(guān)閉所有的燈,。注意：膠片必須在曝光期間保持干燥,，為獲得最佳效果，采取以下措施：

* 確保將多余的底物從膜和塑料紙上wan全去除,。

* 在整個(gè)膠片處理期間,，使用手套。

* 切莫將印記膜置于已顯影的膠片上,，因?yàn)槟z片上的化學(xué)物質(zhì)會(huì)減弱信號(hào),。

10) 將 X 光膠片置于膜的上面。建議第一次曝光 60 秒,。之后可調(diào)整曝光時(shí)間以達(dá)到最佳結(jié)果,。化學(xué)發(fā)光反應(yīng)在底物孵育后的前 5-30 分鐘期間是zui強(qiáng)烈的,。這一反應(yīng)可以持續(xù)幾個(gè)小時(shí),，但強(qiáng)度會(huì)隨時(shí)間下降，如有底物孵育后較長時(shí)間后曝光,，曝光時(shí)間可能需要延長以獲得較強(qiáng)信號(hào),。如果使用 磷光存儲(chǔ)成像設(shè)備（如 Bio-Rad 的分子成像儀系統(tǒng)）或 CCD 照相機(jī)可能需要較長的曝光時(shí)間,。

注意：膠片與膜之間的任何移動(dòng)可能在膠片上造成人為的非特異信號(hào)。

11) 使用合適的顯影劑和定影劑對(duì)膠片進(jìn)行顯影,。如果信號(hào)太強(qiáng),，則縮短曝光時(shí)間或?qū)⒂∮浤みM(jìn)行剝離并降低抗體濃度重新檢測(cè)。

West Femto ECL超敏發(fā)光液 顯色與信號(hào)檢測(cè)

產(chǎn)品訂購信息：

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