質(zhì)粒小量提取試劑盒   質(zhì)粒提取

NobleRyder D9988  質(zhì)粒小量提取試劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit

產(chǎn)品貨號：D9988

產(chǎn)品名稱：質(zhì)粒小量提取試劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit

英文名稱：Plasmid Extraction Mini Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

儲存條件：酶附件-20℃,，其它試劑RT，有效期1年,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyderD9988  質(zhì)粒小量提取試劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞,，根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA的原理特異性提取質(zhì)粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效,、專一地吸附DNA,，可最大限度去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物。 使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)操作,，包括酶切,、PCR、測序,、連接和轉(zhuǎn)化等試驗,。

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽,。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入）,，混勻，置于 2-8℃保存,。如非指明,，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

操作步驟（僅供參考）:

1. 取 1-5mL 細菌培養(yǎng)物,，12000rpm 離心 1min,，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。

2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入250μL溶液Ⅰ(請先檢查是否已加入RNase A）,，使用移液器或旋渦振蕩器che底懸浮細菌細胞沉淀,。注意：如果菌塊未che底混勻，會影響裂解導致質(zhì)粒提取量和純度偏低,。

3. 向離心管中加入250μL溶液Ⅱ,，溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解。注意：混勻一定要溫和,，以免污染細菌基因組 DNA,，此時菌液應變得清亮粘稠，作用時間不要超過 5min,，以免質(zhì)粒受到破壞,。

4. 向離心管中加入350μL溶液Ⅲ，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次,，充分混勻,，此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀，12000rpm離心10min，用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到另一個干凈的離心管中,，盡量不要吸出沉淀,。注意：溶液Ⅲ加入后應立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀,。如果上清中還有微小白色沉淀,，可再次離心后取上清。

5. 取上一步上清,，加入0.4倍體積無水乙醇,，充分混勻。（體積過多可分兩次混合,，然后上柱）,。

6. 將上一步混合液加入吸附柱中(吸附柱加入收集管中)，室溫放置2min,，12000rpm離心1min,，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中(如果為了提高得率,，可將收集管中的液體加入吸附柱再次吸附一次),。

7. 向吸附柱中加入750μL漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min,，棄廢液,，將吸附柱放入收集管中。

8. 向吸附柱中加入700μL漂洗液,，12000rpm離心1min,，棄廢液，將吸附柱放入收集管中,。

9. 12000rpm 離心2min，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗，如酶切,、PCR等,。

10. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50-200μL經(jīng)65℃水浴預熱的洗脫液,，室溫放置2min,，12000rpm離心1min。

11. 為了增加質(zhì)粒的回收效率,，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,，室溫放置 2min，12000rpm 離心1min。

注意事項：

1. 使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁,，如有混濁現(xiàn)象,，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復澄清后再使用,。溶液Ⅱ,、溶液Ⅲ、漂洗液使用后應立即擰緊蓋子,。

2. 洗脫緩沖液體積不應少于50μL,，體積過小影響回收效率；洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌,，若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍),，pH 值低于7.0會降低洗脫效率，DNA產(chǎn)物應保存在-20℃,，以防DNA降解,。

3. 如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒或大于10kb的大質(zhì)粒,，應加大菌體使用量,，使用5-10mL過夜培養(yǎng)物，同時按照比例增加溶液Ⅰ,、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量,，吸附和洗脫時可以適當?shù)难娱L時間，以增加提取效率,。

4. DNA 濃度及純度檢測：得到的質(zhì)粒DNA純度與樣品保存時間,、操作過程中的剪切力等因素有關。得到的 DNA 可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度,。DNA 應在OD260處有顯著吸收峰,，OD260值為1相當于大約50ug/mL雙鏈DNA、40ug/mL單鏈DNA,。OD260/OD280比值應為 1.7-1.9,，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水,，比值會偏低,，因為pH值和離子存在會影響吸光值，但并不表示純度低,。

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產(chǎn)品訂購信息

D9988  質(zhì)粒小量提取試劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit  50T

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