預(yù)包被 96 孔微孔板

標(biāo)準

標(biāo)準稀釋緩沖液

洗滌緩沖液

檢測試劑 A

檢測試劑 B

稀釋劑 A

稀釋劑 B

TMB 底物

停止解決方案

封板機

37°C 培養(yǎng)箱

多通道和單通道移液器以及無菌移液器吸頭

噴瓶或自動洗板機

1.5 毫升管

蒸餾水

吸收性濾紙

100 ml 和 1 L 量筒

酶標(biāo)儀（波長：450 nm）

ELISA 搖床

1） 標(biāo)準品：用推薦體積的標(biāo)準稀釋劑緩沖液制備標(biāo)準品,，制成標(biāo)準溶液,。然后按照方案中的說明，使用標(biāo)準稀釋劑緩沖液對標(biāo)準溶液進行連續(xù)稀釋,。

2） 洗滌緩沖液：按照實驗步驟中的說明,，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。

3） 檢測試劑制備：計算所需工作溶液的總體積,。分別用稀釋劑 A 和稀釋劑 B 以 1：100 的比例稀釋檢測試劑 A 和檢測試劑 B,。

1） 設(shè)定標(biāo)準、測試樣品和對照孔,。

2） 將 50 μl 稀釋的標(biāo)準品分裝到標(biāo)準孔中,。

3） 將 50 μl 標(biāo)準稀釋液緩沖液分裝到對照（零）孔中。

4） 將 50 μl 稀釋樣品分裝到樣品孔中,。

5） 立即向每個孔中分裝 50 μl 檢測試劑 A,。在 37 °C 下孵育 1 小時。

6） 洗滌 3 次,。

7） 將 100 μl 檢測試劑 B 分裝到每個孔中,。在 37 °C 下孵育 30 分鐘。

8） 洗滌 5 次,。

9） 將 90 μl TMB 底物分裝到每個孔中,。在 37 °C 下孵育 10-20 分鐘。

10） 分裝 50 μl 終止液,。

11） 測量 450 nm 處的 OD,。

使用前,，將試劑盒組分和樣品平衡至室溫 （18 - 25 °C）,。建議為每個測試繪制一條標(biāo)準曲線。

1. 在預(yù)涂板上分別設(shè)置標(biāo)準,、測試樣品和對照（零）孔,，然后記錄它們的位置。建議至少一式兩份測量每個標(biāo)準品和樣品,。

2. 將 50 μL 每種標(biāo)準品,、對照品和樣品加入適當(dāng)?shù)目字小?/p>

3. 取下蓋子,，丟棄液體。

4. 立即分裝 50 μl 檢測試劑 A 工作溶液,。用蓋子密封板,，并在 37°C 下孵育 1 小時。

5. 取下蓋子并丟棄溶液,。用 1X 洗滌緩沖液洗滌板 3 次,。

6. 向每個孔中加入 100 μL 檢測試劑 B 工作溶液，密封并在 37°C 下孵育 30 分鐘,。

7. 棄去溶液,，并按照上一步的說明用洗滌緩沖液洗滌板 5 次。

8. 將 90 μl TMB 底物分裝到每個孔中,。用蓋子密封板,，并在 37°C 下孵育 10-20 分鐘。避免暴露在光線下,。孵育時間僅供參考,，最佳時間應(yīng)由最終用戶決定。不要超過 30 分鐘,。

9. 向每個孔中加入 50 μL 終止液,。立即在 450 nm 處讀取。