OrigamiB(DE3) 大腸桿菌表達感受態(tài)細胞

產(chǎn)品信息：

組成 BC205-01 BC205-02
OrigamiB(DE3) Competent 10×100µl 20×100µl
cells pUC19（0.1ng/µl） 5µl 5µl
儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融,。
產(chǎn)品介紹：
本公司生產(chǎn)的 OrigamiB(DE3)感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌 OrigamiB(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受
態(tài)細胞,，可用于 DNA 的化學轉化。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測,，轉化效率可達 107 cfu/µg,，-70℃保存幾個月轉化效
率不發(fā)生改變。每支感受態(tài)可以酌情分裝使用,，降低了實驗的成本,。質(zhì)量穩(wěn)定，使用方便,，質(zhì)優(yōu)價廉,。
基因型： F-ompThsdSB(rB- mB-) galdcmlacY1ahpC(DE3)gor522::Tn10trxB(KanR ,TetR )
抗生素耐藥性：細胞具有和四環(huán)素抗性。
產(chǎn)品特點：
1. 適宜 Amp 抗性質(zhì)粒,。
2. OrigamiB(DE3)菌株包含突變的硫氧還蛋白還原酶 thioredoxin reductase(trxB)和還原酶
glutathione reductase(gor)基因,，表達主要還原途徑的兩個關鍵酶。有利于形成正確折疊的含有二硫鍵的
蛋白,，增強蛋白的可溶性,。
操作步驟（以下操作均按無菌條件的標準進行）：
提示
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感受態(tài)細胞應保存在-70℃，不可多次凍融和放置時間過長,，以避免降低感受態(tài)細胞的轉化效率,。
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進行轉化操作時，應根據(jù)相應溫度及無菌條件的要求進行,。
?
為防止轉化實驗不成功,，可以保留部分連接反應液，以重新轉化,，將損失降到,。
1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中,，置于冰浴中,。
（一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為 50-100μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。應注意所用 DNA 體積
不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一,。）以下實驗以 100μl 感受態(tài)細胞為例,。
2. 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的 DNA，輕輕旋轉離心管以混勻內(nèi)容物,，在冰浴中靜置 30 分鐘,。
3. 將離心管置于 42℃水浴中放置 60 秒鐘，然后快速將管轉移到冰浴中,，使細胞冷卻 2 分鐘,，該過程不要
搖動離心管。（此步驟也可將離心管置于室溫進行,，時間不需十分準確,，夏季或室溫較高時,，可放置
5-8 分鐘左右,；如果室溫較低，可延長時間至 8-15 分鐘左右,。條件允許建議使用 42℃熱激方法,。）
4.向每個離心管中加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）,，混勻后置于 37℃ 150rpm，搖床
振蕩培養(yǎng) 60 分鐘,，目的是使質(zhì)粒上相關的抗性標記基因表達,，使菌體復蘇。
5. 無菌條件下,，取適量菌液加到含相應抗生素的 LB 固體培養(yǎng)基平板上，用無菌的細菌涂布器或玻璃珠將
細胞均勻涂開,。等平板中的液體吸收后,，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時,。（涂布用量可根據(jù)具
體實驗來調(diào)整,。轉化質(zhì)粒在 10ng 左右，90mm 平皿涂布 100µl,，55mm 平皿涂布 50µl,；連接產(chǎn)物的轉
化菌液建議離心后倒掉大部分上清，余 200µl,，取 100µl 用于涂布,。）
6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，視平板上菌落生長情況決定去留,。
相關試劑及培養(yǎng)基的制備方法：
1. LB 液體培養(yǎng)基：稱取 10g Tryptone,，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 燒杯中。加入約 800ml 的去
離子水,，溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液調(diào)節(jié) pH 值至 7.0,。加去離子水定容至 1L,。分裝
后，121℃高壓滅菌 20 分鐘,。
2. SOB 和 SOC 培養(yǎng)基：稱取 20g Tryptone,，5g Yeast Extract，0.5g NaCl 置于 1L 燒杯中加入約 800ml 的
去離子水,，溶解后再補加 10ml 250mM KCl 溶液,，滴加 5M NaOH（約 0.2ml）調(diào) pH 至 7.0。加入
去離子水將培養(yǎng)基定容至 1L,。121℃滅菌 20 分鐘,。使用時加入 5ml 滅菌的 2M MgCl2 溶液（此種培養(yǎng)
基稱為 SOB）。再補加經(jīng) 0.22µm 過濾除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml（此種培養(yǎng)基為 SOC）,。
3. 轉化復蘇細菌用的液體 LB 培養(yǎng)基或 SOC 培養(yǎng)基：可以一次高壓 50ml 液體培養(yǎng)基,，無菌狀態(tài)按 1ml
每管分裝于高壓滅菌的 1.5ml 離心管中，裝于自封袋中,，凍存于-20℃中,，每次用一支?？梢詷O大地避
免培養(yǎng)基污染和減少勞動量,。
4. LB 固體選擇培養(yǎng)基：100ml LB 液體培養(yǎng)基中加入 1.5g 瓊脂粉，搖勻后,，121℃高壓滅菌 20 分鐘,。冷
卻至 50℃左右時加入相應濃度的抗生素（如 AMP 濃度通常為 100µg/ml），混勻后倒在細菌用的無菌
培養(yǎng)皿中,，等瓊脂凝固后即可使用,。
5. IPTG：稱量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于 40ml 滅菌水，濃度為 200mmol/L,。用無菌 0.22μm
過濾膜過濾除菌,。小份分裝后，-20℃保存,。
6. X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml,，小份分裝（1ml/份）后，-20℃避光保存,。


南京萬木春生物科技有限公司（Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向國內(nèi)外市場專業(yè)研發(fā)、生產(chǎn)和銷售細胞、 外泌體,、ELISA 試劑盒,、 抗體、重組蛋白及相關試劑,。產(chǎn)品在免疫學,、信號轉導、代謝,、 神經(jīng)科學等領域內(nèi)都有科學文獻發(fā)表,，被國內(nèi)外多所大學、研究機構和藥學平臺使用并發(fā)表文獻多達1000多次,。我公司憑借優(yōu)異的產(chǎn)品和完善的服務 體系現(xiàn)已受到廣大國內(nèi)外用戶的青睞和認可,。
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抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富,，一抗 1 萬余種,，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項發(fā)明,，原核表達系統(tǒng)穩(wěn)定表達蛋白 1000 余種,。


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