DH5α-T1大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC121-01 BC121-02
DH5α-T1 10×100?l 20×100?l
pUC19 質(zhì)粒 5?l 5?l
儲(chǔ)存條件：-70℃保存,，避免反復(fù)凍融,。不適合在液氮中保存。
產(chǎn)品介紹：
DH5α-T1為常規(guī)DH5α改進(jìn)型菌株,。缺失核酸酶（endA1）基因,，提高質(zhì)粒的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型（recA1）減少插入片
段的同源重組概率,，保證了插入DNA的穩(wěn)定性,。由于lacZΔM15的存在以及l(fā)acIq基因的缺失，故不需要加IPTG,，只需要添加X-gal
就可以進(jìn)行基于α互補(bǔ)原理上的藍(lán)白斑篩選實(shí)驗(yàn),。DH5α-T1在基因組tonA區(qū)域的突變使菌株獲得抵抗T1和T5噬菌體感染的能力。
DH5α-T1感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制成,，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)10 8cfu/μg DNA,。
基因型：F- φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 thi-1 gyrA96 relA1 tonA
菌株抗性：對(duì)氨芐、,、,、、,、和四環(huán)素敏感,。
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟：（以氨芐抗性的 pUC19 質(zhì)粒為例）
1. 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后,，加入 1-5μl 含有 1-100ng 的質(zhì)粒 DNA 到細(xì)胞中,，用手指管底，輕
輕混勻,。
2. 冰水浴中放置 30 分鐘,，不要晃動(dòng)。
3. 42℃熱擊 60 秒鐘,，不要晃動(dòng),。
4. 冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動(dòng),。
5. 加入 500μl 的室溫的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基,。
6. 置于 37℃搖床中,，150-200rpm，復(fù)蘇培養(yǎng) 60 分鐘,。
7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有氨芐抗性的 LB 平板上,。待液體吸干后，倒置平板 37℃培養(yǎng) 12-24 小時(shí),。
（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后,，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清,，留 100μl 左右的液體,，用 200μl 吸頭輕輕吹打散菌塊，
取 10μl 重懸的菌液分多點(diǎn)滴在平板上,，傾斜吸頭,，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來回劃線。這個(gè)方法可以獲得更大的
單克隆菌落,。）
注意事項(xiàng)：
1. 化凍的感受態(tài)細(xì)胞不能長(zhǎng)時(shí)間放置,，影響轉(zhuǎn)化效率；
2. 感受態(tài)細(xì)胞避免反復(fù)凍融,；
3. 操作過程要輕柔,，避免用移液槍反復(fù)吹打；
4. 整個(gè)轉(zhuǎn)化過程應(yīng)注意無菌操作,，避免污染,。


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抗體：兔多抗,、鼠單抗種類豐富，一抗 1 萬余種，二抗 100 多種,；
重組蛋白：多項(xiàng)發(fā)明,，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白 1000 余種。


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