OverExpress C41(DE3)大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品組成：
組成 BC212-01 BC212-02
OverExpress C41(DE3) 10×100 ?l 20×100 ?l
pUC19 質(zhì)粒 5 ?l 5 ?l
儲(chǔ)存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融,。不適合在液氮中保存,。
產(chǎn)品介紹：
OverExpress C41(DE3)菌株適用于毒性蛋白的表達(dá)，來(lái)源于BL21(DE3)菌株,。OverExpress C41(DE3)是通過(guò)毒性蛋白在BL21(DE3)
內(nèi)過(guò)表達(dá)篩選實(shí)驗(yàn)得到的基因突變菌株,，該菌株的基因突變降低了T7 RNA聚合酶的酶活性，下調(diào)毒性蛋白的表達(dá)量使細(xì)胞存活,。
OverExpress C41(DE3)菌株也可以表達(dá)常規(guī)蛋白,，相同條件下，蛋白表達(dá)量略低于BL21(DE3)菌株,。OverExpress C41(DE3)菌株屬于
B菌株,，lon和ompT蛋白酶缺陷型。OverExpress C41(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×10 7 cfu/μg
DNA,。
基因型：F -ompT hsdSB (rB -mB -) gal dcm (DE3)
菌株抗性：對(duì)氨芐，,，和四環(huán)素敏感,。
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟（以氨芐抗性的 pET 質(zhì)粒為例）：
1.將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后,，加入 1-5 μl 含有 1-100 ng 的質(zhì)粒 DNA 到細(xì)胞中,，用手指管底，輕
輕混勻,。
2.冰水浴中放置 30 分鐘,，不要晃動(dòng)。
3.42℃熱擊 60 秒鐘,，不要晃動(dòng),。
4.冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動(dòng),。
5.加入 500 μl 的室溫的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基,。
6.置于 37℃搖床中，150-200 rpm,，復(fù)蘇培養(yǎng) 60 分鐘,。
7.取 50-100 μl 菌液涂布在含有氨芐抗性的 LB 平板上。待液體吸干后,，倒置平板 37℃培養(yǎng) 12-24 小時(shí),。
（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000 rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清,，留 100 μl 左右的液體,，用 200 μl 吸頭輕輕吹打散菌塊，
取 10 μl 重懸的菌液分多點(diǎn)滴在平板上,，傾斜吸頭,，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來(lái)回劃線。這個(gè)方法可以獲得更多更大
的單克隆菌落,。）
蛋白表達(dá)步驟：
1.挑取單菌落,，接種到含 5 ml 帶抗生素的 LB 培養(yǎng)基中。
2.37℃,，200 rpm 震蕩培養(yǎng)細(xì)菌至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（OD600=0.4-0.8）,。
3.加入 IPTG 到終濃度為 0.4 mM，37℃誘導(dǎo) 4 小時(shí)或 16℃誘導(dǎo)過(guò)夜,。（可以設(shè)定不同濃度的 IPTG 來(lái)誘導(dǎo)表達(dá),。）
4.誘導(dǎo)完成后，離心收集菌體,，用合適的方法（如考馬斯亮藍(lán)染膠法,，Western-Blot法或酶活性分析法）分析菌體裂解物的總蛋
白、上清和沉淀組分,，明確表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)狀況（可溶性或不溶性表達(dá)）,。
5.重組蛋白大量表達(dá)時(shí)，可用 10 ml 過(guò)夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到 1 L 培養(yǎng)基中,，當(dāng)培養(yǎng)到 OD600=0.4-0.8 時(shí),，加入終濃度為 0.4 mM 的 IPTG，
37℃誘導(dǎo) 4 小時(shí)或 16℃誘導(dǎo)過(guò)夜（不同蛋白表達(dá)的條件有所不同,，需在實(shí)驗(yàn)中優(yōu)化）,。


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抗體：兔多抗,、鼠單抗種類豐富,，一抗 1 萬(wàn)余種，二抗 100 多種,；
重組蛋白：多項(xiàng)發(fā)明,，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白 1000 余種。


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