dam-/dcm-大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC122-01
dam-/dcm- 20×100?l
pUC19 質(zhì)粒 5?l
儲存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融,。不適合在液氮中保存,。
產(chǎn)品介紹：
本公司生產(chǎn)的dam-/dcm-感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌dam-/dcm-菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞。
dam-/dcm-菌株來源于大腸桿菌K12菌株,，該菌株為dam和dcm甲基化酶失活突變型菌株,，常用于質(zhì)粒DNA的去
dam和dcm甲基化處理，消除dam和dcm甲基化對酶切的影響,。核酸內(nèi)切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高質(zhì)粒
DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量,。甲基化酶的失活突變可能會導(dǎo)致質(zhì)粒DNA在該菌株中會出現(xiàn)突變，不建議連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)
化實(shí)驗(yàn),，僅用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化,。菌株還具有抗T1噬菌體感染的特點(diǎn)。pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>×10 6 cfu/μg DNA,。
基因型：ara-14 leuB6 fhuA31 lacY1 tsx78 glnV44 galK2 galT22mcrA dcm-6 hisG4 rfbD1 R(zgb210::Tn10) TetS
endA1 rspL136 (StrR )dam13::Tn9 (CamR ) xylA-5 mtl-1 thi-1 mcrB1 hsdR2
菌株抗性：對,、有抗性；對氨芐,、,、和四環(huán)素敏感。
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟：
1.將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍,。待細(xì)胞剛化凍后,，加入 1-5μl 含有 1-100ng 的質(zhì)粒 DNA 到細(xì)胞中,，用
手指管底，輕輕混勻,。
2.冰水浴中放置 30 分鐘,，不要晃動。
3.42℃熱擊 60 秒鐘,，不要晃動,。
4.冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動,。
5.加入 500μl 的室溫 SOC 或 LB 培養(yǎng)基,。
6.置于 37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復(fù)蘇培養(yǎng) 60 分鐘,。
7.取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上,。待液體吸干后，倒置平板,，37℃培養(yǎng) 12-18 小時,。
（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm 離心 30 秒鐘,，棄掉上清,，留 100μl 左右的液體，用 200μl 吸
頭輕輕吹打散菌塊,，取 10μl 重懸的菌液分多點(diǎn)滴在平板上,，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液
體來回劃線,。這個方法可以獲得更大的單克隆菌落,。此方法主要適用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化用涂布法,。）
（質(zhì)?？焖俎D(zhuǎn)化步驟：將步驟 2 的時間縮短到 5 分鐘，對于氨芐抗性的質(zhì)粒,，步驟 4 完成后,，可直接涂
布或劃線于含氨芐抗性的 LB 平板上。其它抗性的質(zhì)粒仍需 60 分鐘的復(fù)蘇培養(yǎng),。）