ArcticExpress(DE3)大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC218-01
ArcticExpress(DE3) 20×100?l
pUC19 質(zhì)粒 5?l
儲(chǔ)存條件：-70℃保存,，避免反復(fù)凍融,。
產(chǎn)品說(shuō)明：
ArcticExpress(DE3)細(xì)胞來(lái)源于 BL21-Gold 菌株，屬于 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型的大腸桿菌 B 菌株。菌株含有抗性
的質(zhì)粒能穩(wěn)定表達(dá)海洋細(xì)菌 Oleispira antarctica 的兩個(gè)低溫分子伴侶 Cpn10 和 Cpn60,。這些伴侶蛋白在較低溫度（4-12℃）下,，比
大腸桿菌 GroEL/GroES 表現(xiàn)出更高的活性, 在低溫下可以更好地促進(jìn)重組蛋白的正確折疊，潛在地增加了可溶性重組蛋白的產(chǎn)率和
活性,，克服重組蛋白的錯(cuò)誤折疊和不溶性,。該菌株又具備λ噬菌體 DE3 基因區(qū)，可以表達(dá) T7 RNA 聚合酶,，適用于含有 T7 啟動(dòng)子
的原核表達(dá)載體（如 pET 等）的高效表達(dá),。非 T7 啟動(dòng)子的表達(dá)載體（如 pGEX、pMal,，pTrc 等載體）也可以在該菌株中表達(dá),。
ArcticExpress(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制成，pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率大于 1×107 cfu/μg DNA,。
基因型: F – ompT hsdS(rB– mB –) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA Hte (cpn10 cpn60 Gentr )
菌株抗性：具有,、四環(huán)素抗性。對(duì)氨芐,、,、、,、敏感,。
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟：
1.將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后,，加入質(zhì)粒 DNA 或 5-10μl 連接產(chǎn)物到細(xì)胞中,，用手指管底，輕輕混勻,；
2.冰水浴中放置 30 分鐘,，不要晃動(dòng)；
3.42℃熱擊 60 秒鐘,，不要晃動(dòng),；
4.冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動(dòng),；
5.加入 500μl 無(wú)菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基,；
6.置于 37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復(fù)蘇培養(yǎng) 60 分鐘,；
7.取 50-100μl 菌液涂布在含有 20ug/ml 的和適當(dāng)濃度的轉(zhuǎn)化質(zhì)粒的抗性抗生素的 LB 平板上,。待液體吸干后，倒置平板,，
37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí),。
（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm 離心 30 秒鐘,，棄掉上清,，留 100μl 左右的液體，用 200μl 吸頭輕輕吹打散菌塊,，
取 10μl 重懸的菌液分多點(diǎn)滴在平板上,，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來(lái)回劃線,。這個(gè)方法可以獲得更多更大
的單克隆菌落,。）
蛋白表達(dá)步驟：
1.挑取單菌落，接種到含 5ml 帶抗生素的 LB 培養(yǎng)基中,；
2.37℃,，200rpm 震蕩培養(yǎng)細(xì)菌至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（OD600=0.4-0.8）；
3.加入 IPTG 到終濃度為 0.4mM,，37℃誘導(dǎo) 2-4 小時(shí)或 16℃誘導(dǎo)過(guò)夜,；
（低溫誘導(dǎo)方法：37℃，200rpm 震蕩培養(yǎng)細(xì)菌到 1-2 個(gè) OD 左右,，然后將培養(yǎng)物降溫至 10–13°C,，低溫培養(yǎng) 15 分鐘達(dá)到平衡，將
IPTG 添加到搖瓶中,，最終濃度達(dá)到為 0.1-0.5mM 之間,。繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng) 12-24 小時(shí)。）
4.誘導(dǎo)完成后,，離心收集菌體,，用合適的方法（如考馬斯亮藍(lán)染膠法，Western-Blot 法或酶活性分析法）分析菌體裂解物的總蛋白,、
上清和沉淀組分,，明確表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)狀況（可溶性或不溶性表達(dá)）；
5.大量表達(dá)時(shí),，可用 10ml 過(guò)夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到 1L 培養(yǎng)基中,，當(dāng)培養(yǎng)到 OD600=0.4-0.8 時(shí)，加入終濃度為 0.4mM 的 IPTG,，37℃誘導(dǎo)2-4 小時(shí)或 16℃誘導(dǎo)過(guò)夜（不同蛋白表達(dá)的條件有所不同,，需在實(shí)驗(yàn)中優(yōu)化


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品牌優(yōu)勢(shì)
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抗體：兔多抗,、鼠單抗種類(lèi)豐富,，一抗 1 萬(wàn)余種，二抗 100 多種,；
重組蛋白：多項(xiàng)發(fā)明,，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白 1000 余種。


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