Shuffle T7-K12 大腸桿菌表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC208-01 BC208-02
ShuffleT7-K12 Competent cells 10×100μl 20×100μl
pUC19（0.1ng/μl） 5μl 5μl
儲(chǔ)存條件：-70℃保存,，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品說明：
Shuffle T7-K12菌株來源于大腸桿菌K12菌株,，適用于T7啟動(dòng)子啟動(dòng)的蛋白表達(dá),。細(xì)胞內(nèi)組成型表達(dá)的二
硫鍵異構(gòu)酶DsbC不僅有利于表達(dá)蛋白形成正確的二硫鍵，并具有分子伴侶的功能,，幫助不含二硫鍵的蛋白正
確折疊,。T7 RNA聚合酶基因整合在細(xì)菌染色體上的lac操縱子區(qū)域，組成型表達(dá)的lac阻遏蛋白能降低基因的背
景表達(dá),，有利于毒性蛋白的表達(dá),，沒有λ前噬菌體序列，具有抗T1噬菌體感染特點(diǎn),。Shuffle T7-K12感受態(tài)細(xì)胞
經(jīng)特殊工藝制作,，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率大于10 6 cfu/μg。
基因型：
F′ lac, pro, lacIq /△(ara-leu)7697 araD139 fhuA2 lacZ::T7 gene1△(phoA) PvuII phoR ahpC* galE (or U) galK
λatt::pNEB3-r1-cDsbC (Spec R , lacIq)△trxB rpsL150(StrR )△gor△(malF)3
菌株抗性：對(duì)氨芐,，,，和四環(huán)素敏感，對(duì)和有抗性,。
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟：
1. 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍,。待細(xì)胞剛化凍后，加入質(zhì)粒 DNA 到細(xì)胞中,，用手指管底,，輕輕
混勻；
2. 冰水浴中放置 30 分鐘,，不要晃動(dòng),；
3. 42℃熱擊 60 秒鐘，不要晃動(dòng),；
4. 冰水浴中放置 2 分鐘,，不要晃動(dòng)；
5. 加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基,；
6. 置于 30℃搖床中,，150-200rpm，復(fù)蘇培養(yǎng) 60 分鐘,；
7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上,。待液體吸干后，倒置平板 30℃培養(yǎng) 12-24 小時(shí),。
（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后,，12000rpm 離心 30 秒鐘,，棄掉上清，留 100μl 左右的液體,，用 200μl 吸
頭輕輕吹打散菌塊,，取 10μl 重懸的菌液分多點(diǎn)滴在平板上，傾斜吸頭,，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的
液體來回劃線,。這個(gè)方法可以獲得更多更大的單克隆菌落。）
（質(zhì)?？焖俎D(zhuǎn)化步驟：將步驟 2 的時(shí)間縮短到 5 分鐘，對(duì)于氨芐抗性的質(zhì)粒,，步驟 4 完成后,，可直接涂
布或劃線于含抗生素的平板上。其它抗性的質(zhì)粒仍需 40-60 分鐘的復(fù)蘇培養(yǎng),。）
蛋白表達(dá)步驟：
1. 挑取單菌落,，接種到含 5ml 帶抗生素的 LB 培養(yǎng)基中；
2. 30℃,，200rpm 震蕩培養(yǎng)細(xì)菌至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（OD600=0.4-0.8）,；
3. 加入 IPTG 到終濃度為 0.4mM，30℃誘導(dǎo) 4 小時(shí)或 16℃誘導(dǎo)過夜,；
4. 誘導(dǎo)完成后,，離心收集菌體，用合適的方法（如考馬斯亮藍(lán)染膠法,，Western-Blot法或酶活性分析法）
分析菌體裂解物的總蛋白,、上清和沉淀組分，明確表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)狀況（可溶性或不溶性表達(dá)）,；
5. 重組蛋白大量表達(dá)時(shí),，可用 10ml 過夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到 1L 培養(yǎng)基中，當(dāng)培養(yǎng)到 OD600=0.4-0.8 時(shí),，加入終
濃度為 0.4mM 的 IPTG,，30℃誘導(dǎo) 4 小時(shí)或 16℃誘導(dǎo)過夜（不同蛋白表達(dá)的條件有所不同，需在
實(shí)驗(yàn)中優(yōu)化）,。


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抗體：兔多抗,、鼠單抗種類豐富，一抗 1 萬余種,，二抗 100 多種,；
重組蛋白：多項(xiàng)發(fā)明，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白 1000 余種,。


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