NEB 10-beta 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品信息：
組成 BC401-01
NEB 10-beta Electrocompetent cells 20×50μl
pUC19（0.1ng/μl） 5μl
儲存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融,。
產(chǎn)品說明：
NEB 10-beta電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化,，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。該菌株為DH10B衍生株,，屬大腸桿菌
K12菌株,，特別適用于BAC，Cosmid等大質(zhì)粒骨架的文庫構(gòu)建和大質(zhì)?？寺』驍U(kuò)增,。DNA重組缺陷（recA1）
和I 型內(nèi)切酶缺陷（endA1）的特點(diǎn)有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。該菌株具有抗T1噬菌體
感染 的特點(diǎn),，還可用于藍(lán)/白斑篩選實(shí)驗(yàn),，檢測β-半乳糖苷酶的活性時，無需添加IPTG,，只加X-gal即可,。
pUC19質(zhì)粒檢測感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率大于10 10 cfu/μg。
基因型：
araD139△(ara,leu)7697 fhuA lacX74 galK16 galE15 mcrA80d(lacZ?M15)recA1 relA1 endA1 nupG rpsL rph
spoT1△(mrrhsdRMS-mcrBC)
操作方法：
1. 電極間距為 0.1cm 的電轉(zhuǎn)杯（Gene Pulser®/MicroPulser™ electroporation cuvettes）插入碎冰中,，壓實(shí)冰
面,，冰中靜置 5 分鐘,，使電轉(zhuǎn)杯充分降溫。（電轉(zhuǎn)杯重復(fù)使用方法：每次用完后,，用大量的自來水沖
洗干凈去掉菌液和 DNA,，用蒸餾水洗 3 遍，將其泡在 75%乙醇中 30 分鐘,，取出杯子,，瀝干液體，放
在超凈臺中,，使乙醇充分揮發(fā)，蓋上蓋子放干燥地方備用,。）
2. 取-70℃保存的感受態(tài)細(xì)胞插入冰中,，待細(xì)胞剛化凍后，加入質(zhì)粒 DNA 或連接產(chǎn)物（洗脫或溶解質(zhì)粒
的溶液中離子不能太高,，或用雙蒸水稀釋,，對照 pUC19 可以用無菌水稀釋到 10pg/μl），用手指管
底輕輕混勻,，立即插入冰中,，在超凈臺中用無菌吸頭將細(xì)胞/DNA 混合物快速轉(zhuǎn)移到電擊杯中，避免產(chǎn)
生氣泡,，確保細(xì)胞沉到杯底,，蓋上杯蓋，空管保留待用,。
3. 啟動電轉(zhuǎn)儀,，設(shè)置電擊參數(shù)：2.4kV，200Ω,，25μF(BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser）,。用紙巾擦
掉電轉(zhuǎn)杯外部的水分，將電轉(zhuǎn)杯放入電轉(zhuǎn)槽中進(jìn)行電擊,。完成后,，將電轉(zhuǎn)杯插入冰中，加入950μl無抗
生素的SOC或LB培養(yǎng)基,，并將液體轉(zhuǎn)移到原來保留的感受態(tài)空管中,，37℃，150-250rpm振蕩培養(yǎng)1小時,。
4. 取 100-200μl 左右的菌液或稀釋后的菌液,，涂布于含相應(yīng)抗生素的 LB 平板上，倒置放于 37℃培養(yǎng)箱培
養(yǎng) 12-18 小時,。
注意事項(xiàng)：
1. 電轉(zhuǎn)杯必須預(yù)冷,。
2. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)該在冰水浴中化凍,，加入 DNA 后應(yīng)輕柔混勻，加入 DNA 的體積小于細(xì)胞體積的 1/10,。
3. 一旦 DNA 加入到細(xì)胞中,，電擊操作應(yīng)該立即進(jìn)行。
4. DNA 應(yīng)該溶解在水或 TE 中,，連接酶的存在會降低轉(zhuǎn)化效率,，必要時需純化連接產(chǎn)物。
5. 電擊時,，電轉(zhuǎn)杯中的氣泡,、含高濃度鹽離子的 DNA 或轉(zhuǎn)化產(chǎn)物會導(dǎo)致電弧現(xiàn)象的發(fā)生。
6. 電擊完成后應(yīng)該立刻加上 LB 或 SOC 等復(fù)蘇培養(yǎng)基,，每分鐘延遲加入會導(dǎo)致 3 倍轉(zhuǎn)化效率的降低,。


南京萬木春生物科技有限公司（Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向國內(nèi)外市場專業(yè)研發(fā),、生產(chǎn)和銷售細(xì)胞,、 外泌體、ELISA 試劑盒,、 抗體,、重組蛋白及相關(guān)試劑。產(chǎn)品在免疫學(xué),、信號轉(zhuǎn)導(dǎo),、代謝、 神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域內(nèi)都有科學(xué)文獻(xiàn)發(fā)表,，被國內(nèi)外多所大學(xué),、研究機(jī)構(gòu)和藥學(xué)平臺使用并發(fā)表文獻(xiàn)多達(dá)1000多次。我公司憑借優(yōu)異的產(chǎn)品和完善的服務(wù) 體系現(xiàn)已受到廣大國內(nèi)外用戶的青睞和認(rèn)可,。
品牌優(yōu)勢
1,、產(chǎn)品優(yōu)勢：產(chǎn)品具有高特異性、回收率高,、線性好,、變異系數(shù)低、穩(wěn)定性好,；
2,、質(zhì)量保證：產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，每批次產(chǎn)品必須通過 QA,、QC 檢測才可出庫,；
3,、實(shí)力強(qiáng)大： 標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室、研發(fā)中心,，動物房 ,；
4、技術(shù)支持：技術(shù)部 5*8 小時技術(shù)問題及時解答,；
5,、服務(wù)周到：發(fā)貨及時，三個工作日順豐快遞,；售后無憂,，包退包換。
6,、研發(fā),、生產(chǎn)科研產(chǎn)品：ELISA 試劑盒：人、大小鼠,、牛、兔,、山羊,、倉鼠、豬,、馬,、雞、犬,、豚鼠,、猴、綿羊等多種屬1000多種指標(biāo),；
抗體：兔多抗,、鼠單抗種類豐富，一抗 1 萬余種,，二抗 100 多種,；
重組蛋白：多項(xiàng)發(fā)明，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白 1000 余種,。


掃一掃,，加微信
聯(lián)系電話：19156044901 （同微信） ，QQ： 3361589519