BJ5183-AD- 1 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品信息：
組成 BC403-01
BJ5183-AD-1 Electrocompetent cells 20×50μl
pAdTrack-CMV（10ng/μl） 5μl
儲存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融,。
產(chǎn)品說明：
BJ5183-AD-1電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化,，不能用于熱激轉(zhuǎn)化。該菌株攜帶的pAdEasy-1質(zhì)粒包含了
大部分人腺病毒5型的基因組序列（E1/E3基因缺失）,，表達(dá)可供pAdEasy-1骨架質(zhì)粒和pAdEasy穿梭質(zhì)粒進(jìn)行同源
重組的所有組分,，產(chǎn)生重組腺病毒質(zhì)粒。pAdEasy-1為33.5kb,，具有氨芐抗性,，一旦與穿梭載體重組，其
抗性消失,?？剐缘膒AdTrack-CMV質(zhì)粒檢測感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率大于10 5 cfu/μg。
基因型：endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR ) [pAdEasy-1 (Amp R )]
菌株抗性：對敏感,，有和氨芐抗性,。
操作方法：
1. 電極間距為 0.1cm 的電轉(zhuǎn)杯（Gene Pulser®/MicroPulser™ electroporation cuvettes）插入碎冰中，壓實(shí)冰
面,，冰中靜置 5 分鐘,，使電轉(zhuǎn)杯充分降溫。（電轉(zhuǎn)杯重復(fù)使用方法：每次用完后,，用大量的自來水沖
洗干凈去掉菌液和 DNA,，用蒸餾水洗 3 遍，將其泡在 75%乙醇中 30 分鐘,，取出杯子,，瀝干液體，放
在超凈臺中,，使乙醇充分揮發(fā),，蓋上蓋子放干燥地方備用）。
2. 取-70℃保存的感受態(tài)細(xì)胞插入冰中,，待細(xì)胞剛化凍后,，加入質(zhì)粒 DNA（洗脫或溶解質(zhì)粒的溶液中離子
不能太高，或用雙蒸水稀釋）,，用手指管底輕輕混勻,，立即插入冰中，在超凈臺中用無菌吸頭將
細(xì)胞/DNA 混合物快速轉(zhuǎn)移到電擊杯中,，避免產(chǎn)生氣泡,，確保細(xì)胞沉到杯底，蓋上杯蓋,，空管保留待用,。
3. 啟動電轉(zhuǎn)儀,，設(shè)置電擊參數(shù)：2.4 kV，200Ω,，25 μF(BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser）,。用紙巾擦
掉電轉(zhuǎn)杯外部的水分，將電轉(zhuǎn)杯放入電轉(zhuǎn)槽中進(jìn)行電擊,。完成后,，將電轉(zhuǎn)杯插入冰中，加入950μl無抗
生素的SOC或LB培養(yǎng)基,，并將液體轉(zhuǎn)移到原來保留的感受態(tài)空管中,，37℃，150-250rpm振蕩培養(yǎng)1小
時,。
4. 取 100-200μl 左右的菌液或稀釋后的菌液，涂布于含相應(yīng)抗生素的 LB 平板上,，倒置放于 37℃培養(yǎng)箱培
養(yǎng) 12-18 小時,。
注意事項：
1. 電轉(zhuǎn)杯必須預(yù)冷。
2. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)該在冰水浴中化凍,，加入 DNA 后應(yīng)輕柔混勻,，加入 DNA 的體積小于細(xì)胞體積的 1/10。
3. 一旦 DNA 加入到細(xì)胞中,，電擊操作應(yīng)該立即進(jìn)行,。
4. DNA 應(yīng)該溶解在水或 TE 中，連接酶的存在會降低轉(zhuǎn)化效率,，必要時需純化連接產(chǎn)物,。
5. 電擊時，電轉(zhuǎn)杯中的氣泡,、含高濃度鹽離子的 DNA 或轉(zhuǎn)化產(chǎn)物會導(dǎo)致電弧現(xiàn)象的發(fā)生,。
6. 電擊完成后應(yīng)該立刻加上 LB 或 SOC 等復(fù)蘇培養(yǎng)基，每分鐘延遲加入會導(dǎo)致 3 倍轉(zhuǎn)化效率的降低,。
He, T. C., Zhou, S., da Costa, L. T., Yu, J., Kinzler, K. W. et al. (1998) Proc Natl Acad Sci U S A 95(5):2509-14


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