GV3101 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品信息：
組成 BC308-01
GV3101 Electrocompetent cells 20×50μl
pCAMBIA2301 (10ng/μl) 1 支

儲(chǔ)存條件：-70℃保存,，避免反復(fù)凍融,。
基因型：C58 (rifR ) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) (StrR /GentR ), Nopaline type
產(chǎn)品介紹：
GV3101菌株為農(nóng)桿菌C58型背景，核基因中含有抗性基因Rif,。此菌株還攜帶一種自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能喪
失的質(zhì)粒(disarmed Ti plasmid),。GV3101菌株含有pMP90 (pTiC58DT-DNA)，該質(zhì)粒含有vir基因（vir基因是
TDNA 插入植物基因組所必需的元件,，pMP90 (pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可
輔助植物雙 元表達(dá)載體的T-DNA的轉(zhuǎn)移）,。pMP90 (pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒還含有Str和Gent抗性基因,，賦予
GV3101菌株和抗性。GV3101農(nóng)桿菌適用于擬南芥,、煙草,、玉米、土豆等植物的轉(zhuǎn)基因操
作,。GV3101 電轉(zhuǎn) 感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化,，經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率大于10 5 cfu/μg DNA。
操作方法：
1. 電極間距為0.1cm的電轉(zhuǎn)杯（Gene Pulser®/MicroPulser™ electroporation cuvettes）插入碎冰中,，壓實(shí)冰
面,，冰中靜置5分鐘，使電轉(zhuǎn)杯充分降溫,。（電轉(zhuǎn)杯重復(fù)使用方法：每次用完后,，用大量的自來(lái)水沖洗
干凈去掉菌液和DNA，用蒸餾水洗3遍,，將其泡在75%乙醇中30分鐘,，取出杯子，瀝干液體,，放在超凈
臺(tái)中,，使乙醇充分揮發(fā)，蓋上蓋子放干燥地方備用）
2. 取-70℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘,，待其融化,，加入10ng-1μg質(zhì)粒DNA（洗脫或溶解質(zhì)粒的
溶液中離子不能太高,，可用雙蒸水稀釋?zhuān)捍问褂们白鲱A(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量），用手
管底混勻,，立即插入冰中,，在超凈臺(tái)中用無(wú)菌吸頭將感受態(tài)-質(zhì)粒混合物快速移到電擊杯中,，蓋上
杯蓋,，空管保留待用。
3. 啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀,，設(shè)置電擊參數(shù)：C=25μF,，PC=200ohm，V=2.4KV（此參數(shù)為BioRad公司推薦,，依據(jù)不同
電轉(zhuǎn)儀設(shè)置針對(duì)農(nóng)桿菌合適的電擊參數(shù)）,。用紙巾擦掉電轉(zhuǎn)杯外部的水分，將電轉(zhuǎn)杯快速放入電轉(zhuǎn)槽
中進(jìn)行電擊步驟,。電擊完成后,，將電轉(zhuǎn)杯快速插入冰中，加入700μl無(wú)抗生素的LB 并轉(zhuǎn)移到原來(lái)保留
的感受態(tài)空管中,，28℃,，150-200rpm，振蕩培養(yǎng)2-3小時(shí),。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,，留取200μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊，取100μl的菌液涂布于含相應(yīng)抗生素
的LB或YEB平板上,，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天（當(dāng)平板只含有50 μg/ml Kan 時(shí),，28℃培養(yǎng)48小時(shí)
即可；平板中同時(shí)加入50 μg/ml Kan,，20μg/ml Rif時(shí),，需28℃培養(yǎng)60小時(shí)；如果使用的平板含有50 μg/ml
Rif則需要28℃培養(yǎng)72-90小時(shí)）,。
注意事項(xiàng)：
1. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作,，加入質(zhì)粒的體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10，質(zhì)粒不純或超大質(zhì)粒會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)化
效率急劇下降,。
2. 平板上菌落過(guò)多時(shí),，菌落很小。為了獲得大的菌落,，應(yīng)減少質(zhì)粒用量或減少涂布量,，或?qū)⒕滢D(zhuǎn)移到
新平板上生長(zhǎng)。
3. 使用的工作濃度濃度不應(yīng)高于25 μg/ml，過(guò)高的濃度會(huì)降低生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率,。
4. 具有防止雜菌生長(zhǎng)篩選農(nóng)桿菌的作用,；根據(jù)所用菌株抗性加入或可防止Ti質(zhì)
粒丟失，但不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,，所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)可不考慮添加或,，
Ti質(zhì)粒丟失的概率極低（可忽略）。

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抗體：兔多抗、鼠單抗種類(lèi)豐富,，一抗 1 萬(wàn)余種,，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項(xiàng)發(fā)明,，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白 1000 余種,。


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