Lumafluor Green RetroBeads

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原始,、可靠的熒光示蹤劑

luma fluor/Green retro beads IX(100 l)luma fluor是Lumafuor公司的第一個反向示蹤產(chǎn)品,，也是一個被證明有效的產(chǎn)品(該產(chǎn)品的有效性已被數(shù)百篇從無脊椎動物到哺乳動物實(shí)驗(yàn)的研究論文所證實(shí))。

該示蹤劑產(chǎn)品在體內(nèi)注射時濃度高,，不易擴(kuò)散,，信號強(qiáng)，對活細(xì)胞或活體無毒,，存活時間在一年以上,。它與以下大多數(shù)示蹤劑,、原位雜交檢測技術(shù)和免疫組織化學(xué)技術(shù)兼容,。

Further details are presented in: Katz, L.C., Burkhalter, A., and Dreyer, W.D. Fluorescent latex microspheres as a retrograde neuronal marker for in vivo and in vitro studies of visual cortex. Nature 310: 498-500 (1984), and Katz, L.C. and Iarovici, D.M. Green fluorescent latex microspheres: a new retrograde tracer. Neuroscience 34: 511-520 (1990).

熒光乳膠微球的使用方案 

如何供應(yīng):封閉的小瓶含有懸浮在蒸餾水中的珠子的濃縮溶液。如果紅色珠子用于神經(jīng)元路徑的逆行追蹤,，溶液可以原樣使用,，或者稀釋。在大鼠視覺皮層中,，當(dāng)使用紅色珠子時,，1:4的稀釋度似乎不會降低逆行標(biāo)記的質(zhì)量或程度。然而,，對于初始實(shí)驗(yàn),，我們強(qiáng)烈建議使用全強(qiáng)度的溶液。除蒸餾水外,，標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液(NaCl,，KCl)也可用作稀釋劑。所提供的綠珠*全為逆行追蹤實(shí)驗(yàn)做好了準(zhǔn)備,。不建議稀釋綠珠。

存儲:珠溶液應(yīng)儲存在冰箱中的加濕容器中，以防止蒸發(fā),。不要凍結(jié)！被冰凍的珠子將不起作用,，并且不能被解救。如果珠子變干，它們就不能被重組,。這種材料沒有規(guī)定保存期限，但是,，如果儲存得當(dāng),，可以保存幾年。

應(yīng)用:最好使用壓力注射珠子(例如,，1 ml Hamilton注射器，或加壓空氣注射系統(tǒng)),。對于局部回路工作,，已經(jīng)通過具有30-50 μm直徑吸頭的玻璃移液管注入了非常小的體積(30-50 nl)。對于常規(guī)逆行追蹤,，使用更大體積(0.1-0.3 ul)和更大直徑的移液器吸頭,。然而，即使注射量很大,，珠子也不會從注射部位擴(kuò)散很遠(yuǎn)(通常小于1 mm),。因此,，為了標(biāo)記投射到大結(jié)構(gòu)的所有或大部分神經(jīng)元，應(yīng)該進(jìn)行幾次注射,。不推薦將珠的離子電滲應(yīng)用作為遞送示蹤劑的有效手段,。然而，珠子確實(shí)有一個凈負(fù)電荷,。

生存時間:在大多數(shù)溫血脊椎動物系統(tǒng)中,，注射后的最短有效存活時間約為24小時。標(biāo)記強(qiáng)度隨著存活時間的延長而增加,，最長可達(dá)48小時,。48小時后，沒有觀察到標(biāo)記強(qiáng)度的增加(或減少),。這些值在冷血動物中可能有相當(dāng)大的不同,，建議初始存活時間為一周。最大存活時間尚未確定,，但即使在14個月的存活時間后,，標(biāo)簽在質(zhì)量或程度上也沒有變化。細(xì)胞可能會被*久標(biāo)記,。未觀察到對動物或神經(jīng)元的毒性作用,。

定影和處理:標(biāo)準(zhǔn)固定是用0.1 M磷酸鹽緩沖液洗滌，然后用0.1 M磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)中的4%多聚甲醛洗滌,。戊二醛會產(chǎn)生大量的組織自體熒光,，這可能會模糊珠標(biāo)記的神經(jīng)元,，如果可能，應(yīng)避免使用,。綠珠在戊二醛固定材料中全看不見,。冷凍切片收集在磷酸鹽緩沖液中，固定在明膠包被的載玻片上,，風(fēng)干,。*全干燥后，載玻片可在二甲苯中清洗1分鐘,，蓋上涂有Fluoromount或Krystalon的蓋子,。Fluoromount可從Atomergic Chemetals Corp .，F(xiàn)armingdale,，NY獲得,；Krystalon來自新澤西州吉布森鎮(zhèn)的Harleco (EM Industries)。

短暫接觸酒精和二甲苯不會造成傷害,，但長時間接觸(超過5分鐘)會破壞珠子,。珠子對甘油非常敏感，如果放在含甘油的溶液中會迅速褪色,。在需要非*久性清潔/固定劑的情況下,，水楊酸甲酯優(yōu)于甘油。如果載玻片保存在暗處,，細(xì)胞中的標(biāo)記至少在一年內(nèi)不會褪色(盡管背景自發(fā)熒光可能會顯著增加),。迄今為止，在塑料包埋后保留珠標(biāo)記的嘗試尚未成功,。

觀察:紅色珠子中的染料是羅丹明，因此可以使用任何為羅丹明設(shè)置的熒光濾光片,。一些較舊的尼康羅丹明濾鏡組給出了非常高的背景,，這可以使標(biāo)記的細(xì)胞不可見。Zeiss和Leitz標(biāo)準(zhǔn)羅丹明濾光片均獲得了良好的效果,。對于綠珠,，寬帶熒光素濾光器效果很好,。黃色濾鏡組給出了更強(qiáng)烈的信號，但代價是更高的背景,。窄帶熒光素濾光器將給出比寬帶濾光器弱得多的信號,。

即使經(jīng)過長時間的觀察或顯微攝影，珠子也不會明顯褪色,。

對于低倍率,、低數(shù)值孔徑的干燥物鏡(如X4、X10),，標(biāo)簽通常不可見,。如果細(xì)胞被強(qiáng)烈標(biāo)記，X10浸沒物鏡(數(shù)值孔徑為0.4或更大)或更高功率的干物鏡通常會顯示細(xì)胞,。然而,，X25浸沒物鏡通常會非常清晰地顯示出低倍率物鏡所遺漏的標(biāo)記細(xì)胞,。這些警告對于綠珠來說尤其如此,。在決定實(shí)驗(yàn)無效之前，用浸沒物鏡檢查注射部位附近的切片,。應(yīng)該存在大量局部標(biāo)記的細(xì)胞,。

綠珠用戶的附加信息:在迄今為止所做的工作中,，年輕的動物似乎比年老的動物更好地傳遞標(biāo)簽。此外,，年輕動物的組織自體熒光較低,。因此，在涉及綠珠的實(shí)驗(yàn)中,，如果可能的話,，最好使用較年輕的動物。

因?yàn)榫G珠在比紅珠更短的波長下被激發(fā),，組織自體熒光是一個更大的問題,。因此，將自發(fā)熒光最小化的努力將產(chǎn)生更好的對比信號,。減少自體熒光的方法包括:1)使用更薄的切片(例如30 um而不是40或50 μm),；2)使用更年輕的動物,，以及3)在蓋玻片后立即檢查切片(背景隨著時間推移而增加)。

相關(guān)產(chǎn)品信息：

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