人結(jié)直腸腺癌細胞(HCT-15)HCT-15細胞從一名男性Dukes C結(jié)直腸癌患者的大腸中分離出來,。

【細胞名稱】人結(jié)直腸腺癌細胞

【細胞別名】HCT-15;HCT15

【種屬來源】人

【組織來源】結(jié)直腸腺癌

【細胞形態(tài)】上皮細胞樣

【生長特性】貼壁生長

【培養(yǎng)體系】1640+10%FBS+1%P/S

【傳代比例】1:3-1:4,，每周換液2-3 次

【培養(yǎng)條件】氣相：95%空氣+5%二氧化碳，溫度：37℃

【凍存條件】凍存液：55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO,；存儲條件：液氮

【安全性】建議在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并做好個人防護。

【用途】僅供科研使用

二,、復蘇及傳代方法

1,、細胞株的復蘇（凍存管）

（1）將凍存管在37℃水浴鍋中迅速全融化，并適當輕輕搖晃促融,?？焖佟?a>全融化可以提高細胞的復蘇效果,。

（2）打開凍存管前時用75%酒精擦拭細胞凍存管外壁,。

（3）將全融化的細胞直接離心,，或者轉(zhuǎn)移至無菌15ml或其它合適無菌離心管中，400g離心5min,，吸除上清,，注意不要吸走細胞沉淀，然后用新鮮*全培養(yǎng)液重懸后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)器皿,，混勻,，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)。

（4）第二天視貼壁或生長狀態(tài),，更換培養(yǎng)液,。

注意：如果收到的凍存管不能及時進行復蘇，還請置于-80℃或液氮中進行暫存,，并盡快復蘇進行培養(yǎng),。

2、細胞株的復蘇（T25瓶）

（1）將收到T25瓶脫外包后用75%酒精擦拭瓶外壁,。

（2）置于倒置顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),，看是否有異常；無異常后,，采用移液器移去多余的培養(yǎng)液,，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)過夜。

（3）第二天視貼壁或生長狀態(tài),，考慮進行換液或傳代,，傳代比例參考1:2~1:4。

三,、注意事項

1、每支凍存管約含1×106個細胞,，體積為1ml,，預期存活率60-90%，建議復蘇至1個T25瓶或1個6cm培養(yǎng)皿中,。如果復蘇后存活率較低,，可以消化后轉(zhuǎn)移至3.5cm培養(yǎng)皿/T12.5瓶中，這樣細胞生長會更好,。

2,、如果本產(chǎn)品是常溫運輸，并且是培養(yǎng)瓶中充滿*全培養(yǎng)液的貼壁細胞,，收到細胞后：

（1）及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象,。

（2）用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2~4小時,，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

（3）仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關(guān)信息,。

（4）靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢,、拍照，記錄細胞狀態(tài),。

3,、如果細胞密度超過85%請盡快進行傳代操作；如果懸浮的細胞較多,，請將培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中靜置過夜以使懸浮的細胞再次貼壁,。如果收到的是常溫運輸?shù)碾x心管裝的懸浮細胞，可以直接取出轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),。若培養(yǎng)液顏色正常則保留培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),，并且在*次更換培養(yǎng)液時，保留一半原培養(yǎng)液,，并加入一半新鮮培養(yǎng)液,，這樣可以盡量避免由于培養(yǎng)液或血清差異導致細胞生長的不適應，確保細胞良好的生長狀態(tài),。

4,、細胞培養(yǎng)請在生物安全柜臺中進行操作，并嚴格遵守無菌操作,。

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