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產(chǎn)品名稱：兔結(jié)腸平滑肌細胞

組織來源：結(jié)腸

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)優(yōu)良

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

兔結(jié)腸平滑肌體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞簡介：

兔結(jié)腸平滑肌分離自結(jié)腸組織,；結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,，在第3骶椎平面連接直腸,。結(jié)腸分升結(jié)腸,、橫結(jié)腸,、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分，大部分固定于腹后壁,，結(jié)腸的排列酷似英文字母“M”,，將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層,、固有層,、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結(jié)締組織）,，肌層（內(nèi)環(huán)形,、外縱行兩層平滑肌）,，外膜（纖維膜或漿膜）,。結(jié)腸平滑肌細胞主要分布于黏膜肌層和肌層的內(nèi)環(huán)形、外縱行平滑??；結(jié)腸運動少而緩慢，對刺激的反應也較遲緩,。結(jié)腸平滑肌在食物消化與吸收,、腸道運動和物質(zhì)分泌、誘發(fā)全身炎癥反應以及細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導途徑等研究中起著重要的作用,。結(jié)腸平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中；2周后細胞匯合,，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏；細胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時,，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。結(jié)腸平滑肌運動活性受到神經(jīng)遞質(zhì),、胃腸激素和藥物等因素的調(diào)節(jié),。隨著現(xiàn)代胃腸動力學研究的進展，對胃腸運動的研究已從器官,、組織水平發(fā)展到細胞,、分子水平，要求在胃腸道單個平滑肌細胞標本上來完成各種電生理,、藥理和分子生物學等實驗,。體外培養(yǎng)細胞，由于影響因素單一,，是研究細胞功能以及相應的細胞信號轉(zhuǎn)導機制的基礎(chǔ),。

方法簡介：

實驗室分離的兔結(jié)腸平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的兔結(jié)腸平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

培養(yǎng)步驟：

一,、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中）,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。

二,、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

a）,、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）,、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
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FCGR3A Protein Human 重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 標簽)

FCGR1重組小鼠 CD64 / FCGR1 蛋白 (His & AVI 標簽), Biotinylated Protein

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MSLN重組人 MSLN / Mesothelin 蛋白  Protein

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收到細胞如何處理,？

1,、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象。若有,，請拍照,，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,。

2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

3,、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息,，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清比例、所需細胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。

4,、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢,、拍照,，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài)。

5,、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代；若未超過80%,，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,，瓶蓋可稍微擰松,。

6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸,。鏡檢時,，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作