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懸浮細胞的轉染

來源:天津益元利康生物科技有限公司   2025年02月06日 17:32  

一,、懸浮細胞都有什么?

懸浮生長的細胞是指在體外培養(yǎng)時不依賴于支持物表面,,而是在培養(yǎng)液中以懸浮狀態(tài)生長的細胞,。這類細胞通常來源于血液、淋巴組織,,例如某些腫瘤細胞和轉化細胞,。懸浮細胞的特點是細胞呈圓形,一般不貼于支持物上,,易于大量繁殖,。在體外培養(yǎng)的細胞類型中,懸浮細胞可以呈單個細胞或細小的細胞團生長,。

懸浮細胞的轉染

以下是一些常見的懸浮生長細胞類型:

  • 小鼠腹水瘤 S180

  • 小鼠骨髓瘤 NS1 SP2/0

  • 人造血系腫瘤細胞 U937,、HL60、K562

  • 人原髓細胞白血病細胞 HL-60

  • 小鼠白血病細胞 WEHI-3

  • 人白血病細胞 K-562

此外,,還有一些工業(yè)上應用的細胞系,,如 CHO、BHK,、HEK293 等,,這些細胞主要用于重組蛋白質生產(chǎn)。在獸用生物制品中,,常用的懸浮培養(yǎng)的細胞系包括 BHK21 和 MDCK 細胞,。

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二,、懸浮細胞的轉染


      1.提一天將細胞接種6孔板,每孔細胞數(shù)約為3×105 個,,
      2.第二天,,換液后加入1mL培養(yǎng)基,,再加20 μL 慢病毒,
      3.混勻后繼續(xù)培養(yǎng),,
      4.12h后觀察細胞狀態(tài),,并更換為新鮮培養(yǎng)基,
      5.轉染1周后,,觀察細胞生長情況,,中途可以換液,保持細胞的活性,。
 轉染(Transfection)是指將DNA或者RNA導入真核細胞中的過程,。轉染的目的是產(chǎn)生重組蛋白,或特異性增強或抑制轉染細胞中的基因表達,。細胞轉染有哪些類型和方法呢,?

      1)根據(jù)導入的核酸存在于宿主細胞的時間長短,可以分為瞬轉穩(wěn)轉,。
     

瞬轉

穩(wěn)轉

導入的DNA沒有整合到基因組中,,而是保留在細胞核上

導入的DNA整合到基因組中

導入的遺傳物質不傳遞到子代; 遺傳改變只是暫時的

導入的遺傳物質能夠代代相傳,;遺傳改變是的

不需要選擇性篩選

需要選擇性篩選出穩(wěn)定轉染的細胞

DNA載體和RNA都可用于瞬時轉染

只有DNA載體可用于穩(wěn)定轉染,;RNA本身不能穩(wěn)定地導入細胞中

導入的遺傳物質的高拷貝數(shù)導致高水平的蛋白質表達。

單拷貝數(shù)或低拷貝數(shù)的穩(wěn)定整合的DNA導致較低水平的蛋白質表達,。

通常在轉染后24-96小時內(nèi)收獲細胞,。

需要2-3周的時間篩選出穩(wěn)定轉染的細胞克隆。

通常不適合使用具有誘導型啟動子的載體的研究,。

適用于使用帶有誘導型啟動子的載體的研究,。

 
















   2)根據(jù)轉染方式可以分為化學,生物,,物理方法,。
       

轉染類型

轉染方法

原理

應用

特點

化學轉染法

磷酸鈣法

磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞

穩(wěn)轉,

瞬轉

不適用于原代細胞,,操作簡便但重復性差,,有些細胞不適用

陽離子
脂質體法

帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內(nèi)吞

穩(wěn)轉,

瞬轉
所有細胞

適用性廣,,轉染效率高,,重復性好,但轉染時需除血清,。轉染效果隨細胞類型變化大

DEAE-右旋糖苷法

帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內(nèi)吞

瞬轉

相對簡便、結果可重復,,但對細胞有一定的毒副作用,,轉染時需除血清

生物轉入法

病毒介導法

通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中

穩(wěn)轉

可用于難轉染的細胞,、原代細胞,體內(nèi)細胞等

逆轉錄病毒


特定宿主

但攜帶基因不能太大細胞需處分裂期,,需考慮安全因素

腺病毒

通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中

瞬時轉染
特定宿主

可用于難轉染的細胞
需考慮安全因素

物理轉染法

Biolistic顆粒傳遞法

將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀,,再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞,DNA在胞內(nèi)逐步釋放表達

瞬轉

可用于:人的表皮細胞,,纖維原細胞,,淋巴細胞系以及原代細胞

電穿孔法

高脈沖電壓破壞細胞膜電位,DNA通過膜上形成的小孔導入

穩(wěn)轉,,瞬轉
所有細胞

適用性廣但細胞致死率高,,DNA和細胞用量大

顯微注射法

用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核

穩(wěn)轉,瞬轉

轉染細胞數(shù)有限,,多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞

     












































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懸浮細胞的轉染



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