一,、懸浮細胞都有什么,?
懸浮生長的細胞是指在體外培養(yǎng)時不依賴于支持物表面,,而是在培養(yǎng)液中以懸浮狀態(tài)生長的細胞,。這類細胞通常來源于血液,、淋巴組織,,例如某些腫瘤細胞和轉(zhuǎn)化細胞,。懸浮細胞的特點是細胞呈圓形,一般不貼于支持物上,,易于大量繁殖,。在體外培養(yǎng)的細胞類型中,懸浮細胞可以呈單個細胞或細小的細胞團生長,。
![image.png 懸浮細胞的轉(zhuǎn)染](https://img43.chem17.com/9/20250206/638744599851562605151.png)
以下是一些常見的懸浮生長細胞類型:
小鼠腹水瘤 S180
小鼠骨髓瘤 NS1 和 SP2/0
人造血系腫瘤細胞 U937,、HL60、K562
人原髓細胞白血病細胞 HL-60
小鼠白血病細胞 WEHI-3
人白血病細胞 K-562
此外,,還有一些工業(yè)上應(yīng)用的細胞系,,如 CHO、BHK,、HEK293 等,這些細胞主要用于重組蛋白質(zhì)生產(chǎn),。在獸用生物制品中,,常用的懸浮培養(yǎng)的細胞系包括 BHK21 和 MDCK 細胞。
天津益元利康生物科技有限公司可提供種類豐富齊全的細胞系,,各種細胞,、蛋白,、抗體,試劑,,歡迎咨詢哦~
二,、懸浮細胞的轉(zhuǎn)染
1.提一天將細胞接種6孔板,每孔細胞數(shù)約為3×105 個,,
2.第二天,,換液后加入1mL培養(yǎng)基,再加20 μL 慢病毒,,
3.混勻后繼續(xù)培養(yǎng),,
4.12h后觀察細胞狀態(tài),并更換為新鮮培養(yǎng)基,,
5.轉(zhuǎn)染1周后,,觀察細胞生長情況,中途可以換液,,保持細胞的活性,。
轉(zhuǎn)染(Transfection)是指將DNA或者RNA導(dǎo)入真核細胞中的過程。轉(zhuǎn)染的目的是產(chǎn)生重組蛋白,,或特異性增強或抑制轉(zhuǎn)染細胞中的基因表達,。細胞轉(zhuǎn)染有哪些類型和方法呢?
1)根據(jù)導(dǎo)入的核酸存在于宿主細胞的時間長短,,可以分為瞬轉(zhuǎn)和穩(wěn)轉(zhuǎn),。
瞬轉(zhuǎn) | 穩(wěn)轉(zhuǎn) |
導(dǎo)入的DNA沒有整合到基因組中,而是保留在細胞核上 | 導(dǎo)入的DNA整合到基因組中 |
導(dǎo)入的遺傳物質(zhì)不傳遞到子代,; 遺傳改變只是暫時的 | 導(dǎo)入的遺傳物質(zhì)能夠代代相傳,;遺傳改變是的 |
不需要選擇性篩選 | 需要選擇性篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞 |
DNA載體和RNA都可用于瞬時轉(zhuǎn)染 | 只有DNA載體可用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染;RNA本身不能穩(wěn)定地導(dǎo)入細胞中 |
導(dǎo)入的遺傳物質(zhì)的高拷貝數(shù)導(dǎo)致高水平的蛋白質(zhì)表達,。 | 單拷貝數(shù)或低拷貝數(shù)的穩(wěn)定整合的DNA導(dǎo)致較低水平的蛋白質(zhì)表達,。 |
通常在轉(zhuǎn)染后24-96小時內(nèi)收獲細胞。 | 需要2-3周的時間篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞克隆,。 |
通常不適合使用具有誘導(dǎo)型啟動子的載體的研究,。 | 適用于使用帶有誘導(dǎo)型啟動子的載體的研究。 |
2)根據(jù)轉(zhuǎn)染方式可以分為化學(xué),,生物,,物理方法。
轉(zhuǎn)染類型 | 轉(zhuǎn)染方法 | 原理 | 應(yīng)用 | 特點 |
化學(xué)轉(zhuǎn)染法 | 磷酸鈣法 | 磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞 | 穩(wěn)轉(zhuǎn),, 瞬轉(zhuǎn) | 不適用于原代細胞,,操作簡便但重復(fù)性差,有些細胞不適用 |
陽離子 | 帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復(fù)合物被細胞內(nèi)吞 | 穩(wěn)轉(zhuǎn),, 瞬轉(zhuǎn) | 適用性廣,,轉(zhuǎn)染效率高,,重復(fù)性好,但轉(zhuǎn)染時需除血清,。轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大 | |
DEAE-右旋糖苷法 | 帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細胞內(nèi)吞 | 瞬轉(zhuǎn) | 相對簡便,、結(jié)果可重復(fù),但對細胞有一定的毒副作用,,轉(zhuǎn)染時需除血清 | |
生物轉(zhuǎn)入法 | 病毒介導(dǎo)法 | 通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中 | 穩(wěn)轉(zhuǎn) | 可用于難轉(zhuǎn)染的細胞,、原代細胞,體內(nèi)細胞等 |
逆轉(zhuǎn)錄病毒 | 特定宿主 | 但攜帶基因不能太大細胞需處分裂期,,需考慮安全因素 | ||
腺病毒 | 通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中 | 瞬時轉(zhuǎn)染 | 可用于難轉(zhuǎn)染的細胞 | |
物理轉(zhuǎn)染法 | Biolistic顆粒傳遞法 | 將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀,,再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞,DNA在胞內(nèi)逐步釋放表達 | 瞬轉(zhuǎn) | 可用于:人的表皮細胞,,纖維原細胞,,淋巴細胞系以及原代細胞 |
電穿孔法 | 高脈沖電壓破壞細胞膜電位,DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入 | 穩(wěn)轉(zhuǎn),,瞬轉(zhuǎn) | 適用性廣但細胞致死率高,,DNA和細胞用量大 | |
顯微注射法 | 用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核 | 穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn) | 轉(zhuǎn)染細胞數(shù)有限,,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細胞 |
天津益元利康生物科技有限公司
(一)輻射五大服務(wù)方向:
1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理,;
2. 國外試劑訂購(直訂,或境外代理),;
3. 基因組測序(二代,,二代+三代);
4. 基因分型(SNP檢測):低/中/中 高通量項目,;
5. 生物樣本運輸(國內(nèi),、);
(二)多家代理品牌,,涉及30多種較有名品牌,,經(jīng)營代理500多個品牌:
Qiagen、Sigma,、R&D,、Epigentek、ThermoFisher,、DNA Genotek,、USA Scientific、
Matreya,、Sage Science,、List Labs、Macrocyclics,、Steraloids,、NIBSC、mobio,、immunodx,、cellsystems、medicago,、abcam,、CST、Roche,、Bethyl,、sino Biological、clodrosome,、adi BIO-WORLD,、TOKU-E、HYPHEN BioMed,、moltox,、ZeptoMetrix International Humic、biocytex,、Toxin Technology,、Streck、Elastin,、biomax,、Orflo Technologies、Accegen,、Advbiomart,、genlantis、Cygnus Technologies LLC,、Enzyme Research,、Bio/Data Corporation、Greer Lab ,、Solarbio,、bangslabs、bioline,、musechem,、hyphen-biomed、polyplus,、moltox ,、exiqon、pentapharm,、verichemlabs,、GenStar,、ALZET、lucernatechnologies ,、meridian,、origene、horizon discovery,、Reagents,、megazyme、elisasystems………
所有生物試劑耗材都可以進口,,特別是冷門品牌,,均能給客戶購買到。價格優(yōu),,貨期短,,可加急,快10天到貨,;保證服務(wù)質(zhì)量,,所有產(chǎn)品均提供售后服務(wù)。大部分客戶我們提供貨到付款服務(wù),,
公司自成立依靠過硬的服務(wù)和良好的信譽與各大企事業(yè)單位,、科研單位建立長期合作??蛻舭ū贝?,清華,地大,,中科院各所,,各大藥企等等。
專業(yè)訂購國內(nèi)外試劑耗材,,常備現(xiàn)貨,,一手貨源,歡迎合作,。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載,、摘編或利用其它方式使用上述作品,。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”,。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,,目的在于傳遞更多信息,,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任,。其他媒體,、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,,并自負版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容,、版權(quán)等問題,,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利,。