慢病毒轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞全流程詳解

一,、細(xì)胞種板

將細(xì)胞種在12孔板中,，每孔1.5×10^5個(gè)細(xì)胞,。每孔加入1ml wan全培養(yǎng)基,。
二,、病毒感染

1. 待細(xì)胞生長(zhǎng)至30%～50%時(shí)開始轉(zhuǎn)染,。
2. 將病毒從冰箱取出,，放在冰上融化,。
3. 打開生物安全柜,，關(guān)閉風(fēng)機(jī),，戴好帽子和口罩。
4. 棄去培養(yǎng)基,，用PBS洗三次,。
5. 每孔加入500ul wan全培養(yǎng)基。
6. 根據(jù)公式計(jì)算每孔所需病毒量：每孔病毒量（μL）= MOI x 細(xì)胞數(shù) / 病毒滴度（TU/mL）× 1000,。

7. 4小時(shí)后,，再向孔板中加入500ul wan全培養(yǎng)基，補(bǔ)足1ml,。

三,、換液

 感染后24小時(shí)，吸去含病毒的培養(yǎng)液,，換上新鮮的 wan全培養(yǎng)液,，繼續(xù)37℃培養(yǎng)。

四,、觀察與篩選

感染后48小時(shí),，通過熒光顯微鏡初步觀察GFP表達(dá)效率。一般感染后72小時(shí)達(dá)到表達(dá)高峰,。
對(duì)于攜帶Puromycin抗性基因的病毒,，換上含適當(dāng)濃度Puromycin的新鮮 wan全培養(yǎng)液，篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞株,。

天津益元利康生物科技有限公司：

（一）輻射五大服務(wù)方向：

1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理,；

2. 國外試劑訂購（直訂，或境外代理）,；

3. 基因組測(cè)序（二代,，二代+三代）；

4. 基因分型（SNP檢測(cè)）：低/中/中 高通量項(xiàng)目,；

5. 生物樣本運(yùn)輸（國內(nèi),、）；

（二）多家代理品牌,，涉及30多種較有名品牌,，經(jīng)營代理500多個(gè)品牌：

Qiagen、Sigma,、R&D,、Epigentek、ThermoFisher,、DNA Genotek,、USA Scientific、

Matreya、Sage Science,、List Labs,、Macrocyclics、Steraloids,、NIBSC,、mobio、immunodx,、cellsystems,、medicago、abcam,、CST,、Roche、Bethyl,、sino Biological,、clodrosome,、adi BIO-WORLD,、TOKU-E、HYPHEN BioMed,、moltox,、ZeptoMetrix International Humic、biocytex,、Toxin Technology,、Streck、Elastin,、biomax,、Orflo Technologies、Accegen,、Advbiomart,、genlantis、Cygnus Technologies LLC,、Enzyme Research,、Bio/Data Corporation、Greer Lab ,、Solarbio,、bangslabs、bioline,、musechem,、hyphen-biomed、polyplus、moltox ,、exiqon,、pentapharm、verichemlabs,、GenStar,、ALZET、lucernatechnologies ,、meridian,、origene、horizon discovery,、Reagents,、megazyme、elisasystems………

所有生物試劑耗材都可以進(jìn)口,，特別是冷門品牌,，均能給客戶購買到。價(jià)格優(yōu),，貨期短,，可加急，快10天到貨,；保證服務(wù)質(zhì)量,，所有產(chǎn)品均提供售后服務(wù)。大部分客戶我們提供貨到付款服務(wù),，

公司自成立依靠過硬的服務(wù)和良好的信譽(yù)與各大企事業(yè)單位,、科研單位建立長(zhǎng)期合作?？蛻舭ū贝?，清華，地大,，中科院各所,，各大藥企等等。

專業(yè)訂購國內(nèi)外試劑耗材,，常備現(xiàn)貨,，一手貨源，歡迎合作,。