總蛋白提取試劑盒
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海貝博生物科技有限公司
- 品牌 貝博生物
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/3/14 8:57:07
- 訪問次數(shù) 406
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| 供貨周期 | 一周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
保存溫度
2-8℃
總蛋白提取試劑盒注意事項(xiàng)
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存,。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài),，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴,，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完,！
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài),，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴,，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完,！
有效期
一年
檢測(cè)方法
WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等
適用樣本
動(dòng)物細(xì)胞/組織
總蛋白提取試劑盒產(chǎn)品特點(diǎn)
1.使用方便,，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨,、反復(fù)凍融,、超聲破碎等前處理,。
2.提取過程簡(jiǎn)單方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí),。
3.含蛋白穩(wěn)定劑,，提取的蛋白穩(wěn)定,。
4.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),，背景干擾低,。
5.總蛋白提取液含多種有效成分,，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白,，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀,。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化,。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF,、Aprotinin、Leupeptin,、Pepstatin A,、Bestatin、E-64,，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性,。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶,、半蛋白酶,、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等,。
2.提取過程簡(jiǎn)單方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí),。
3.含蛋白穩(wěn)定劑,，提取的蛋白穩(wěn)定,。
4.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí),，背景干擾低,。
5.總蛋白提取液含多種有效成分,，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白,，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀,。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化,。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF,、Aprotinin、Leupeptin,、Pepstatin A,、Bestatin、E-64,，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性,。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶,、半蛋白酶,、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等,。
產(chǎn)品應(yīng)用
WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等
儀器準(zhǔn)備
1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.勻漿機(jī)/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.振蕩器
3.勻漿機(jī)/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
試劑準(zhǔn)備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
2.蛋白定量試劑盒
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項(xiàng)
?旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落,。
?蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài),，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋,。
?實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷,；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫,。
?蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,，不影響使用，溶解后正常使用。
?如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完,，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液,。
?可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
?下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè),，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間,。
?Western Blot實(shí)驗(yàn)內(nèi)參可以選用beta-actin,、GAPDH、Tubulin,。
離心機(jī)轉(zhuǎn)速有相對(duì)離心力（RCF,，×g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（RPM，r/min）兩種表示方式,，有些離心機(jī)設(shè)置有RPM和×g顯示切換,，但部分離心機(jī)沒有自動(dòng)切換功能,。需要用下面的公式進(jìn)行換算：g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 為有效離心半徑,，即從離心機(jī)軸心到離心收集管底部中心位置的長(zhǎng)度，單位為厘米) 例如: 轉(zhuǎn)速為3000rpm,，有效離心半徑為10 cm,，則相對(duì)離心力（RCF，×g）為=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）,。
?蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài),，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋,。
?實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷,；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫,。
?蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,，不影響使用，溶解后正常使用。
?如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完,，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液,。
?可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
?下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè),，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間,。
?Western Blot實(shí)驗(yàn)內(nèi)參可以選用beta-actin,、GAPDH、Tubulin,。
離心機(jī)轉(zhuǎn)速有相對(duì)離心力（RCF,，×g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（RPM，r/min）兩種表示方式,，有些離心機(jī)設(shè)置有RPM和×g顯示切換,，但部分離心機(jī)沒有自動(dòng)切換功能,。需要用下面的公式進(jìn)行換算：g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 為有效離心半徑,，即從離心機(jī)軸心到離心收集管底部中心位置的長(zhǎng)度，單位為厘米) 例如: 轉(zhuǎn)速為3000rpm,，有效離心半徑為10 cm,，則相對(duì)離心力（RCF，×g）為=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）,。
使用方法
細(xì)胞樣本總蛋白提?。?br/>懸浮細(xì)胞蛋白提取：
1. 提取液準(zhǔn)備：
每500 μl冷的總蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物,，混勻后置冰上備用,。
2. 取5×106個(gè)細(xì)胞，在4℃,，2500×g條件下離心5分鐘,，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干,，收集細(xì)胞,。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清,。
4. 每5×106 -1×107個(gè)細(xì)胞（大約50 mg細(xì)胞/50 μl細(xì)胞沉淀體積）中加入500 μl冷的總蛋白提取液,，吹打混勻后，在4℃條件下振蕩20-30分鐘,，至細(xì)胞充分裂解,，無明顯細(xì)胞沉淀。
5. 在4℃,，12000×g條件下離心15分鐘,。
6. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,，即可得到總蛋白。
7. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn),。
貼壁細(xì)胞蛋白提?。?br/>1. 提取液準(zhǔn)備：
每500 μl冷的總蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用,。
2. 小心吸取貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液,。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干PBS,。
4. 加入適量冷的總蛋白提取液,，振蕩15-30分鐘，至細(xì)胞充分裂解,，用細(xì)胞刮刀刮一遍,，將裂解液吸入另一干凈離心管。
5. 在4℃,，12000×g條件下離心15分鐘,。
6. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到總蛋白,。
7. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn),。
組織樣本總蛋白提取：
1. 提取液準(zhǔn)備：
每500 μl冷的總蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物,，混勻后置冰上備用,。
2. 取50-100 mg組織樣本，用PBS洗干凈,，然后用刀盡可能剪碎,，加入500 μl總蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機(jī)勻漿至無明顯肉眼可見固體,。
3. 將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中,，在4℃條件下振蕩10-20分鐘。
4. 在4℃,，10000-14000×g條件下離心15分鐘,。
5. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到總蛋白,。
6. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn),。
1. 提取液準(zhǔn)備：
每500 μl冷的總蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物,，混勻后置冰上備用,。
2. 取5×106個(gè)細(xì)胞，在4℃,，2500×g條件下離心5分鐘,，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干,，收集細(xì)胞,。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清,。
4. 每5×106 -1×107個(gè)細(xì)胞（大約50 mg細(xì)胞/50 μl細(xì)胞沉淀體積）中加入500 μl冷的總蛋白提取液,，吹打混勻后，在4℃條件下振蕩20-30分鐘,，至細(xì)胞充分裂解,，無明顯細(xì)胞沉淀。
5. 在4℃,，12000×g條件下離心15分鐘,。
6. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,，即可得到總蛋白。
7. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn),。
貼壁細(xì)胞蛋白提?。?br/>1. 提取液準(zhǔn)備：
每500 μl冷的總蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用,。
2. 小心吸取貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液,。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干PBS,。
4. 加入適量冷的總蛋白提取液,，振蕩15-30分鐘，至細(xì)胞充分裂解,，用細(xì)胞刮刀刮一遍,，將裂解液吸入另一干凈離心管。
5. 在4℃,，12000×g條件下離心15分鐘,。
6. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到總蛋白,。
7. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn),。
組織樣本總蛋白提取：
1. 提取液準(zhǔn)備：
每500 μl冷的總蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物,，混勻后置冰上備用,。
2. 取50-100 mg組織樣本，用PBS洗干凈,，然后用刀盡可能剪碎,，加入500 μl總蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機(jī)勻漿至無明顯肉眼可見固體,。
3. 將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中,，在4℃條件下振蕩10-20分鐘。
4. 在4℃,，10000-14000×g條件下離心15分鐘,。
5. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到總蛋白,。
6. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn),。
常見問題分析
1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解,，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑A的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理,，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻,。
2.細(xì)胞裂解速度慢？
為了充分保證提取得到的蛋白的活性,，提取液采用的保護(hù)蛋白的配方,，裂解能力溫和,，下游應(yīng)用范圍廣,。適當(dāng)延長(zhǎng)裂解的時(shí)間即可。
3.用什么方法定量蛋白,？
建議用BCA法,。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份,，導(dǎo)致定量不準(zhǔn),。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量,。
4.提取時(shí)出現(xiàn)膠狀沉淀？
蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)少量透明膠狀物,，屬正常現(xiàn)象,。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下,，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)即可；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,，則可以通過超聲處理,，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。檢測(cè)一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,，例如NF-kappaB,、p53等時(shí),，不必進(jìn)行超聲處理。
5.提取的蛋白具有活性嗎,？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞,，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性,。
處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解,，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑A的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理,，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻,。
2.細(xì)胞裂解速度慢？
為了充分保證提取得到的蛋白的活性,，提取液采用的保護(hù)蛋白的配方,，裂解能力溫和,，下游應(yīng)用范圍廣,。適當(dāng)延長(zhǎng)裂解的時(shí)間即可。
3.用什么方法定量蛋白,？
建議用BCA法,。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份,，導(dǎo)致定量不準(zhǔn),。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量,。
4.提取時(shí)出現(xiàn)膠狀沉淀？
蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)少量透明膠狀物,，屬正常現(xiàn)象,。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下,，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)即可；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,，則可以通過超聲處理,，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。檢測(cè)一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,，例如NF-kappaB,、p53等時(shí),，不必進(jìn)行超聲處理。
5.提取的蛋白具有活性嗎,？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞,，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性,。
參考文獻(xiàn)
1.Keyu Luo et al.
Multiple integrin ligands provide a highly adhesive and osteoinductive surface that improves selective cell retention technology
Acta biomaterialia 2019 （IF=6.638）
2.Chang Yu et al.
Targeted iron nanoparticles with platinum-(IV) prodrugs and anti-EZH2 siRNA show great synergy in combating drug resistance in vitro and in vivo
Biomaterials 2018 （IF=10.317）
3.Bing Li et al.
SWATH label-free proteomics analyses revealed the roles of oxidative stress and antioxidant defensing system in sclerotia formation of Polyporus umbellatus
Sci Rep. 2017 （IF=5.228）
4.Yan Li et al.
Tat PTD-Endostatin-RGD: A novel protein with anti-angiogenesis effect in retina via eye drops
Biochimica et Biophysica Acta 2016 （IF=5.083）
5.Jie Li et al.
Sex hormones regulate cerebral drug metabolism via brain miRNAs: down-regulation of brain CYP2D by androgens reduces the analgesic effects of tramadol
British Journal of Pharmacology 2015 （IF=5.259）
6.Pin Huan et al.
Identification of differentially expressed proteins involved in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigas
Journal of Proteomics 2012 （IF=5.074）
Multiple integrin ligands provide a highly adhesive and osteoinductive surface that improves selective cell retention technology
Acta biomaterialia 2019 （IF=6.638）
2.Chang Yu et al.
Targeted iron nanoparticles with platinum-(IV) prodrugs and anti-EZH2 siRNA show great synergy in combating drug resistance in vitro and in vivo
Biomaterials 2018 （IF=10.317）
3.Bing Li et al.
SWATH label-free proteomics analyses revealed the roles of oxidative stress and antioxidant defensing system in sclerotia formation of Polyporus umbellatus
Sci Rep. 2017 （IF=5.228）
4.Yan Li et al.
Tat PTD-Endostatin-RGD: A novel protein with anti-angiogenesis effect in retina via eye drops
Biochimica et Biophysica Acta 2016 （IF=5.083）
5.Jie Li et al.
Sex hormones regulate cerebral drug metabolism via brain miRNAs: down-regulation of brain CYP2D by androgens reduces the analgesic effects of tramadol
British Journal of Pharmacology 2015 （IF=5.259）
6.Pin Huan et al.
Identification of differentially expressed proteins involved in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigas
Journal of Proteomics 2012 （IF=5.074）
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