蛋白提取試劑盒
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 公司名稱 上海貝博生物科技有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/1/21 14:09:05
- 訪問次數(shù) 231
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| 供貨周期 | 一周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
保存溫度
2-8℃
總蛋白提取試劑盒注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存,。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài),，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋,。
3.試劑拆封后請盡快使用完,！
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài),，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋,。
3.試劑拆封后請盡快使用完,！
有效期
一年
檢測方法
WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等
適用樣本
動物細(xì)胞/組織
總蛋白提取試劑盒產(chǎn)品特點
1.使用方便，從細(xì)胞,，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨,、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理,。
2.提取過程簡單方便,，將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
3.含蛋白穩(wěn)定劑,，提取的蛋白穩(wěn)定,。
4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5.總蛋白提取液含多種有效成分,，可以充分釋放胞漿蛋白,、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀,。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF,、Aprotinin,、Leupeptin、Pepstatin A,、Bestatin,、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性,。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,，包括蛋白酶、半蛋白酶,、天冬氨酸蛋白酶,、丙氨酰-氨基肽酶等。
2.提取過程簡單方便,，將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
3.含蛋白穩(wěn)定劑,，提取的蛋白穩(wěn)定,。
4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5.總蛋白提取液含多種有效成分,，可以充分釋放胞漿蛋白,、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀,。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF,、Aprotinin,、Leupeptin、Pepstatin A,、Bestatin,、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性,。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,，包括蛋白酶、半蛋白酶,、天冬氨酸蛋白酶,、丙氨酰-氨基肽酶等。
產(chǎn)品應(yīng)用
WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等
儀器準(zhǔn)備
1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
試劑準(zhǔn)備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
2.蛋白定量試劑盒
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
?旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,，避免開蓋時液體灑落。
?蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài),，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴,，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
?實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷,；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷,。整個過程須保持樣品處于低溫。
?蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,，不影響使用,，溶解后正常使用。
?如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完,，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液,。
?可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
?下游實驗如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測,，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,，注意提取過程保持低溫操作,，縮短離心時間,。
?Western Blot實驗內(nèi)參可以選用beta-actin、GAPDH,、Tubulin,。
離心機轉(zhuǎn)速有相對離心力（RCF,，×g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（RPM，r/min）兩種表示方式,，有些離心機設(shè)置有RPM和×g顯示切換,，但部分離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進(jìn)行換算：g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 為有效離心半徑,，即從離心機軸心到離心收集管底部中心位置的長度,，單位為厘米) 例如: 轉(zhuǎn)速為3000rpm，有效離心半徑為10 cm,，則相對離心力（RCF,，×g）為=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
?蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài),，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴,，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
?實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷,；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷,。整個過程須保持樣品處于低溫。
?蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,，不影響使用,，溶解后正常使用。
?如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完,，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液,。
?可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
?下游實驗如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測,，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,，注意提取過程保持低溫操作,，縮短離心時間,。
?Western Blot實驗內(nèi)參可以選用beta-actin、GAPDH,、Tubulin,。
離心機轉(zhuǎn)速有相對離心力（RCF,，×g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（RPM，r/min）兩種表示方式,，有些離心機設(shè)置有RPM和×g顯示切換,，但部分離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進(jìn)行換算：g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 為有效離心半徑,，即從離心機軸心到離心收集管底部中心位置的長度,，單位為厘米) 例如: 轉(zhuǎn)速為3000rpm，有效離心半徑為10 cm,，則相對離心力（RCF,，×g）為=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
使用方法
細(xì)胞樣本總蛋白提?。?br />懸浮細(xì)胞蛋白提?。?br />1. 提取液準(zhǔn)備：
每500 μl冷的總蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用,。
2. 取5×106個細(xì)胞,，在4℃，2500×g條件下離心5分鐘,，小心吸取培養(yǎng)基,，盡可能吸干，收集細(xì)胞,。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次,，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5×106 -1×107個細(xì)胞（大約50 mg細(xì)胞/50 μl細(xì)胞沉淀體積）中加入500 μl冷的總蛋白提取液,，吹打混勻后,，在4℃條件下振蕩20-30分鐘，至細(xì)胞充分裂解,，無明顯細(xì)胞沉淀,。
5. 在4℃，12000×g條件下離心15分鐘,。
6. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,，即可得到總蛋白。
7. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br />
貼壁細(xì)胞蛋白提?。?br />1. 提取液準(zhǔn)備：
每500 μl冷的總蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物,，混勻后置冰上備用。
2. 小心吸取貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液,。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次,，每次洗滌后盡可能吸干PBS。
4. 加入適量冷的總蛋白提取液，振蕩15-30分鐘,，至細(xì)胞充分裂解,，用細(xì)胞刮刀刮一遍，將裂解液吸入另一干凈離心管,。
5. 在4℃,，12000×g條件下離心15分鐘。
6. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,，即得到總蛋白,。
7. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br />組織樣本總蛋白提取：
1. 提取液準(zhǔn)備：
每500 μl冷的總蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物,，混勻后置冰上備用,。
2. 取50-100 mg組織樣本，用PBS洗干凈,，然后用刀盡可能剪碎,，加入500 μl總蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機勻漿至無明顯肉眼可見固體,。
3. 將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中,，在4℃條件下振蕩10-20分鐘。
4. 在4℃,，10000-14000×g條件下離心15分鐘,。
5. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到總蛋白,。
6. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br />
每500 μl冷的總蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用,。
2. 取5×106個細(xì)胞,，在4℃，2500×g條件下離心5分鐘,，小心吸取培養(yǎng)基,，盡可能吸干，收集細(xì)胞,。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次,，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5×106 -1×107個細(xì)胞（大約50 mg細(xì)胞/50 μl細(xì)胞沉淀體積）中加入500 μl冷的總蛋白提取液,，吹打混勻后,，在4℃條件下振蕩20-30分鐘，至細(xì)胞充分裂解,，無明顯細(xì)胞沉淀,。
5. 在4℃，12000×g條件下離心15分鐘,。
6. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,，即可得到總蛋白。
7. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br />
貼壁細(xì)胞蛋白提?。?br />1. 提取液準(zhǔn)備：
每500 μl冷的總蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物,，混勻后置冰上備用。
2. 小心吸取貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液,。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次,，每次洗滌后盡可能吸干PBS。
4. 加入適量冷的總蛋白提取液，振蕩15-30分鐘,，至細(xì)胞充分裂解,，用細(xì)胞刮刀刮一遍，將裂解液吸入另一干凈離心管,。
5. 在4℃,，12000×g條件下離心15分鐘。
6. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,，即得到總蛋白,。
7. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br />組織樣本總蛋白提取：
1. 提取液準(zhǔn)備：
每500 μl冷的總蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物,，混勻后置冰上備用,。
2. 取50-100 mg組織樣本，用PBS洗干凈,，然后用刀盡可能剪碎,，加入500 μl總蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機勻漿至無明顯肉眼可見固體,。
3. 將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中,，在4℃條件下振蕩10-20分鐘。
4. 在4℃,，10000-14000×g條件下離心15分鐘,。
5. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到總蛋白,。
6. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br />
常見問題分析
1.蛋白濃度低,？
處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低,。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時間即可,。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻,。
2.細(xì)胞裂解速度慢,？
為了充分保證提取得到的蛋白的活性，提取液采用的保護(hù)蛋白的配方,，裂解能力溫和,，下游應(yīng)用范圍廣。適當(dāng)延長裂解的時間即可,。
3.用什么方法定量蛋白,？
建議用BCA法。不適合用Bradford法,，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份,，導(dǎo)致定量不準(zhǔn),。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量,。
4.提取時出現(xiàn)膠狀沉淀？
蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時會出現(xiàn)少量透明膠狀物,，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物,。不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下,，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實驗即可；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,，則可以通過超聲處理,，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘,，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗,。檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB,、p53等時,，不必進(jìn)行超聲處理。
5.提取的蛋白具有活性嗎,？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞,，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性,。
處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低,。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時間即可,。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻,。
2.細(xì)胞裂解速度慢,？
為了充分保證提取得到的蛋白的活性，提取液采用的保護(hù)蛋白的配方,，裂解能力溫和,，下游應(yīng)用范圍廣。適當(dāng)延長裂解的時間即可,。
3.用什么方法定量蛋白,？
建議用BCA法。不適合用Bradford法,，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份,，導(dǎo)致定量不準(zhǔn),。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量,。
4.提取時出現(xiàn)膠狀沉淀？
蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時會出現(xiàn)少量透明膠狀物,，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物,。不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下,，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實驗即可；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,，則可以通過超聲處理,，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘,，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗,。檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB,、p53等時,，不必進(jìn)行超聲處理。
5.提取的蛋白具有活性嗎,？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞,，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性,。
參考文獻(xiàn)
1.Keyu Luo et al.
Multiple integrin ligands provide a highly adhesive and osteoinductive surface that improves selective cell retention technology
Acta biomaterialia 2019 （IF=6.638）
2.Chang Yu et al.
Targeted iron nanoparticles with platinum-(IV) prodrugs and anti-EZH2 siRNA show great synergy in combating drug resistance in vitro and in vivo
Biomaterials 2018 （IF=10.317）
3.Bing Li et al.
SWATH label-free proteomics analyses revealed the roles of oxidative stress and antioxidant defensing system in sclerotia formation of Polyporus umbellatus
Sci Rep. 2017 （IF=5.228）
4.Yan Li et al.
Tat PTD-Endostatin-RGD: A novel protein with anti-angiogenesis effect in retina via eye drops
Biochimica et Biophysica Acta 2016 （IF=5.083）
5.Jie Li et al.
Sex hormones regulate cerebral drug metabolism via brain miRNAs: down-regulation of brain CYP2D by androgens reduces the analgesic effects of tramadol
British Journal of Pharmacology 2015 （IF=5.259）
6.Pin Huan et al.
Identification of differentially expressed proteins involved in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigas
Journal of Proteomics 2012 （IF=5.074）
Multiple integrin ligands provide a highly adhesive and osteoinductive surface that improves selective cell retention technology
Acta biomaterialia 2019 （IF=6.638）
2.Chang Yu et al.
Targeted iron nanoparticles with platinum-(IV) prodrugs and anti-EZH2 siRNA show great synergy in combating drug resistance in vitro and in vivo
Biomaterials 2018 （IF=10.317）
3.Bing Li et al.
SWATH label-free proteomics analyses revealed the roles of oxidative stress and antioxidant defensing system in sclerotia formation of Polyporus umbellatus
Sci Rep. 2017 （IF=5.228）
4.Yan Li et al.
Tat PTD-Endostatin-RGD: A novel protein with anti-angiogenesis effect in retina via eye drops
Biochimica et Biophysica Acta 2016 （IF=5.083）
5.Jie Li et al.
Sex hormones regulate cerebral drug metabolism via brain miRNAs: down-regulation of brain CYP2D by androgens reduces the analgesic effects of tramadol
British Journal of Pharmacology 2015 （IF=5.259）
6.Pin Huan et al.
Identification of differentially expressed proteins involved in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigas
Journal of Proteomics 2012 （IF=5.074）
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