【產(chǎn)品名稱】禽liu感通用/H5亞型（AIV-U/AIV-H5）核酸PCR試劑盒

【包裝規(guī)格】 50T/盒

【產(chǎn)品方法】雙重實時熒光PCR法

【預(yù)期用途】

適用于禽liu感通用/H5亞型（AIV-U/AIV-H5）檢測,，可用于臨床禽liu感通用/H5亞型（AIV-U/AIV-H5）感染的輔助診斷，但不作確診使用,。

禽liu感通用/H5亞型（AIV-U/AIV-H5）核酸PCR試劑盒【檢驗原理】

本試劑盒采用TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術(shù),，設(shè)計一對禽liu感通用/H5亞型（AIV-U/AIV-H5）特異性引物，結(jié)合一條特異性探針,，利用相應(yīng)儀器對PCR 過程進(jìn)行實時監(jiān)測,，實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷,。

【主要組成成份】

反應(yīng)液,、酶液、陽性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品,。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存,、運輸,、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個月,。

【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler,、Bio-Rad,、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【保存和運輸】上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,，長期保存可置-70℃,，但不能超過 6 個月，標(biāo)本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸,， 嚴(yán)禁反復(fù)凍融,。

【使用方法】 

1 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理 

血液、體液和棉拭子樣本取100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中,。

1.2 核酸提取

推薦采用核酸提qu或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取,，請按照試劑說明書進(jìn)行操作。

2.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)） 

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設(shè)所需要的PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N（N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照,；反應(yīng)管 數(shù)每滿 10 份，多配制 1 份）,，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到PCR 反應(yīng)管中,，21μL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)） 

將步驟1 提取的核酸,、陽性質(zhì)控品,、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,，蓋好管蓋,，混勻，短 暫離心,。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi),；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息,，反應(yīng)體系設(shè)置為25μL,； 熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE,，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,，選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定 

設(shè)置Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時,，根據(jù)分析后圖像 調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值（一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)）、stop 值（一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)）,，以及 Threshold 的 Value 值（上下拖動閾值線至高于陰性對照）,，重新分析結(jié)果,。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線,； 可疑：檢測通道 35值≤38,，建議重復(fù)檢測，如果檢測通道仍為 35值≤38,，且曲線有明顯的增長曲線,， 判定為陽性，否則為陰性,； 陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值,。

6.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

 陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示； 陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,，且 Ct 值≤32,； 以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效,。

7.檢測方法的局限性 

1. 樣本檢測結(jié)果與樣本收集,、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān),；

2. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

3. 陽性對照,、擴增產(chǎn)物泄漏,，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

4. 病原體在流行過程中基因突變,、重組,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

5. 不同的提取方法存在提取效率差異,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

6.試劑運輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果,； 7.本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段,。

【注意事項】

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完quan混勻并短暫離心,；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊,；

5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服,；

6.樣本處理、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器,；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進(jìn)行處理,。

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