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AX-S014 熒光定量PCR（QPCR）
| 參考價(jià) | ￥100-￥300/件 |
- 公司名稱 武漢傲星生物科技有限公司
- 品牌其他品牌
- 型號AX-S014
- 所在地武漢市
- 廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
- 更新時間2024/3/12 10:39:42
- 訪問次數(shù) 163
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實(shí)驗(yàn)概念
RT-PCR即逆轉(zhuǎn)錄pcr,其原理是提取組織或細(xì)胞中的總RNA,，利用Oligo(dt)或隨機(jī)引物反轉(zhuǎn)錄，獲得cDNA模板,，進(jìn)一步通過PCR反應(yīng)獲得目的基因產(chǎn)物或檢測其表達(dá)水平,。與其他技術(shù)相比，RT-PCR技術(shù)更加靈敏易于操作,，在細(xì)胞/組織基因表達(dá)水平的半定量檢測,，特定基因cDNA克隆及RNA病毒檢測等分子生物學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。
實(shí)驗(yàn)流程
樣本接收→引物合成→提取總RNA→RNA濃度測定→逆轉(zhuǎn)錄成cdna→熒光定量PCR→數(shù)據(jù)分析
注意事項(xiàng)
1.普通PCR及realtime PCR樣本 注意事項(xiàng) | ||||
樣本形式 | 處理方式 | 保存 | 運(yùn)輸 | 可檢測指標(biāo)數(shù) |
新鮮組織 | 1,、 0.1g新鮮組織(至少) | 液氮或-80℃ | 干冰 | 3-5個 |
2,、 加入1ml的Trizol（可選） | ||||
細(xì)胞 | 1、 培養(yǎng)基吸出棄掉,，用PBS洗滌兩次后,，吸棄PBS,。 | 液氮或-80℃ | 干冰 | 2-3個 |
2、 每1*10^6個細(xì)胞加1ml TRIzol,，細(xì)胞刮板掛或吹打使細(xì)胞脫落,，吹至拉絲狀，收集之后凍存?zhèn)溆谩?/span> | ||||
全血 | 1,、大于等于2ml全血加入EDTA或肝素抗凝,。 | 4℃ | 冰袋 | 3-5個 |
2、4h內(nèi)進(jìn)行淋巴細(xì)胞分離 | 液氮或-80℃ | 干冰 | 詢問 | |
體液 | 1. 12000rpm/min離心10-20min,，取沉淀 | 液氮或-80℃ | 干冰 | 詢問 |
1.組織在1-2min內(nèi)完成取材,，速凍，,，并立即放入-80℃或液氮中保存,。 | ||||
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
擴(kuò)增完畢后，進(jìn)入結(jié)果分析界面,，看CT值,、起始拷貝數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)偏差等,，如果是SYBR做的話,，再看下溶解曲線。以β-actin為內(nèi)參照基因,，與對照組相比,，得到目的基因表達(dá)的相對定量值（RQ值），將RQ值用于統(tǒng)計(jì)分析,。
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