免疫熒光(IF)是一種利用熒光定位顯色的技術(shù),，它不僅能顯示蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位,，還能輸出令人驚奇的彩圖,。細(xì)胞免疫熒光(IF-IC)需細(xì)胞生長(zhǎng)/固定在玻璃載玻片上進(jìn)行,，在進(jìn)行清洗,、固定,、破膜和染色時(shí),，細(xì)胞必須附著足夠牢固,，否則就會(huì)出現(xiàn)常說的掉片問題,。貼壁細(xì)胞天然就能固定到支持介質(zhì)上，但是對(duì)于懸浮細(xì)胞,，如何固定牢固,？尤其能像貼壁細(xì)胞一樣，那才是期望的效果,。靶點(diǎn)科技給你帶來懸浮細(xì)胞固定的解決方案,。

SHI-FIX玻片, 只為懸浮細(xì)胞固定的解決方案,。

懸浮細(xì)胞免疫熒光中的挑戰(zhàn)

由于懸浮細(xì)胞不依賴支持物表面生長(zhǎng)，其在玻片上的粘附是一大挑戰(zhàn),。傳統(tǒng)離心甩片或涂片法制備的細(xì)胞片存在細(xì)胞分布不均或固定不牢的問題,，影響后續(xù)染色和顯微觀察。IF-IC通常不作為懸浮細(xì)胞的檢測(cè)手段,，這是因?yàn)閼腋〖?xì)胞粘附玻片能力的不足仍是一大難題,。

一般貼壁細(xì)胞粘附在包被的玻片上，但懸浮細(xì)胞并不適合,，在科學(xué)刊物中避免使用懸浮細(xì)胞IF-IC的傾向非常明顯,。但若您研究某個(gè)蛋白在懸浮細(xì)胞中的表達(dá)，您能將懸浮細(xì)胞牢固地粘在蓋玻片上IF-IC嗎,？首先,，您可使用特殊的離心柱和離心機(jī)使細(xì)胞粘附在玻片上。您也可以先對(duì)懸浮細(xì)胞進(jìn)行固定,、破膜,、染色和清洗，最后將它們粘附在包被玻片上,。這兩種方法都需復(fù)雜步驟,，對(duì)于特定細(xì)胞需優(yōu)化條件。如果能讓懸浮細(xì)胞粘附在玻片上,，讓它們能像貼壁細(xì)胞一樣IF-IC,，豈不美哉？

Shi-Fix玻片,，只為懸浮細(xì)胞固定免疫熒光

為克服以上挑戰(zhàn),，Shikhar Biotech開發(fā)出專門的懸浮細(xì)胞免疫熒光專用Shi-fix™玻片，您只需添加懸浮細(xì)胞,、無需離心即可將細(xì)胞牢固地粘附在玻片,，后續(xù)可對(duì)粘附細(xì)胞進(jìn)行特定刺激。懸浮細(xì)胞可在玻片上單層/分層生長(zhǎng),，后續(xù)可像貼壁細(xì)胞般進(jìn)行IF-IC,，顯著簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程并提高染色效率。

Shi-fix™ plus玻片比Shi-fix™玻片具有更強(qiáng)的吸附力,，若您的臨床樣本中懸浮細(xì)胞量少,，可考慮搭配Shi-fix™ plus玻片！

Shi-Fix玻片實(shí)驗(yàn)操作具體步驟

1. 用PBS清洗收集的懸浮細(xì)胞,，并用PBS將其重懸為2~5×10⁶/mL濃度的細(xì)胞懸液,；

2. 為便于操作，將Shi-fix^™玻片放在12孔板中。將細(xì)胞懸液滴加Shi-fix^™玻片上(2~3×10⁵個(gè)細(xì)胞/玻片),；

3. 將含Shi-fix^™玻片的12孔板放在水平臺(tái)面上,，室溫靜置讓細(xì)胞附著20~30分鐘(對(duì)于某些類型的細(xì)胞，孵育時(shí)間越長(zhǎng)附著效果越好,，但不要超過1小時(shí)),；

4. 向含Shi-fix^™玻片的12孔板兩側(cè)邊緣加入0.5 mL PBS(不可直接滴到玻片)，輕柔搖動(dòng)3~5分鐘清洗未粘附的細(xì)胞(可放置水平搖床上緩慢搖動(dòng)),。

5. 顯微鏡檢查細(xì)胞附著情況,。如需進(jìn)一步培養(yǎng)，加入1mL培養(yǎng)基,；或者直接進(jìn)行固定,、破膜和免疫熒光染色。

Shi-Fix玻片固定懸浮細(xì)胞結(jié)果圖

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