大鼠椎間盤纖維環(huán)細胞采用膠原酶-聯合消化法并結合軟骨細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來。大鼠椎間盤纖維環(huán)細胞分離自椎間盤組織,；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，由軟骨板,、纖維環(huán),、髓核組成的一個密封體。上下有軟骨板,，是透明軟骨復蓋于椎體上,，下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來,。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構成,，位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊,，使纖維環(huán)成為堅實的組織,，能承受較大的彎曲和扭轉負荷。纖維環(huán)的前側及兩側較厚,，而后側較薄,。纖維環(huán)的前部有強大的前縱韌帶，后側的后縱韌帶較窄,、較薄,。纖維環(huán)細胞密度為9000個細胞/mm3，其外層的細胞呈梭型,，主要屬于纖維細胞,，內層細胞呈圓形，主要屬于軟骨細胞,。在培養(yǎng)的情況下,，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結構表現，它們的核較圓,，核仁較明顯,。細胞質內可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內質網和滑面內質網。細胞質內線粒體多，為橢圓形,，有的可看到雙層單位膜,，由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體。細胞質內有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復合體和分泌顆粒,，纖維環(huán)細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛,，保證纖維環(huán)生理代謝活動所需的構造物質的供給。一但這種供給減少,，纖維環(huán)的生物性能就會減弱,，椎間盤開始退變。纖維環(huán),，位于椎間盤的周緣部,，由纖維軟骨組成，纖維環(huán)的纖維在椎體間斜行,，在橫切面上排列成同心環(huán)狀,，相鄰環(huán)的纖維具有相反的斜度，而相互交叉,。纖維環(huán)細胞位于膠原纖維束之前,，合成和分泌纖維環(huán)細胞外基質，維持正常的纖維環(huán)結構和功能,。

1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細胞一次,；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃、5%CO2,、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4.待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基,。

備注：由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,，以上方法僅供各實驗室參考

客戶在細胞培養(yǎng)過程中,，有任何技術問題可以技術服務電話： 按 2，我們隨時給予解答,。

1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

2.在細胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3.傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長,，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。