1. 前期準備

- 實驗材料：獲取神經(jīng)干細胞（如從胚胎腦組織分離）,、微重力模擬裝置,、神經(jīng)干細胞專用培養(yǎng)基（含 B27 添加劑,、EGF,、bFGF 的 DMEM/F12 培養(yǎng)基）,、多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)容器,、無菌器械等,。

- 設(shè)備準備：與腫瘤細胞培養(yǎng)類似,，調(diào)試賽奧維度CellSpace-3D微重力三維細胞培養(yǎng)系統(tǒng)，確保溫度,、氣體環(huán)境適宜,。

2. 細胞分離與接種

- 細胞分離：解剖獲取胚胎腦組織，在無菌條件下剪碎,，用胰蛋白酶消化后,，通過機械吹打制成單細胞懸液,，過濾去除組織塊，離心收集細胞,。

- 接種：將神經(jīng)干細胞以 2 - 3×10? 個/mL 的密度接種到微重力培養(yǎng)裝置中,，因神經(jīng)干細胞易貼壁，包被多聚賴氨酸可促進貼壁,。

3. 培養(yǎng)過程

- 每 2 - 3 天添加適量新鮮培養(yǎng)基,，維持營養(yǎng)成分。觀察細胞神經(jīng)球形成情況,，神經(jīng)球直徑達到一定大小時,，可進行傳代培養(yǎng)。

- 采用免疫熒光技術(shù)檢測神經(jīng)干細胞標志物（如 Nestin）的表達,，以鑒定細胞特性,。

4. 誘導(dǎo)分化：培養(yǎng)一定時間后，可更換為含血清的分化培養(yǎng)基,，在微重力環(huán)境下誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元,、星形膠質(zhì)細胞等分化，通過免疫細胞化學(xué)檢測相應(yīng)細胞標志物（如 β - Tubulin III 用于神經(jīng)元,，GFAP 用于星形膠質(zhì)細胞）評估分化效果,。