大鼠軟骨細胞采用膠原酶-聯(lián)合消化制備而來。大鼠軟骨細胞分離自軟骨組織,；軟骨組織由軟骨細胞,、基質(zhì)及纖維構(gòu)成。軟骨組織再生能力強,，這些增生的幼稚細胞形似纖維母細胞,，以后逐漸變?yōu)檐浌悄讣毎⑿纬绍浌腔|(zhì),，細胞被埋在軟骨陷窩內(nèi)而變?yōu)殪o止的軟骨細胞,。根據(jù)軟骨組織內(nèi)所含纖維成分的不同，可將軟骨分為透明軟骨,、彈性軟骨和纖維軟骨三種,，其中以透明軟骨的分布較廣，結(jié)構(gòu)也較典型,。軟骨細胞（chondrocyte）位于軟骨陷窩內(nèi),。幼稚的軟骨細胞位于軟骨組織的表層，單個分布,，體積較小,，呈橢圓形，長軸與軟骨表面平行,，越向深層的軟骨細胞體積之間增大呈圓形,，細胞核圓形或卵圓形，染色淺,，細胞質(zhì)弱嗜堿性,，常見數(shù)量不一的脂滴,。成熟的軟骨細胞多2-8個成群分布于軟骨陷窩內(nèi)，這些軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成,，稱為同源細胞群,。電鏡下，軟骨細胞有突起和皺褶,，細胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達的高爾基復合體及少量的線粒體,。在組織切片中，軟骨細胞收縮為不規(guī)則形,，在軟骨囊和細胞之間出現(xiàn)較大的腔隙,。體外培養(yǎng)的軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義,。軟骨細胞存在于關(guān)節(jié)軟骨中,，負責分泌II型膠原和其它類型的膠原以及非膠原的細胞外基質(zhì)大分子。成軟骨細胞的增殖和分化與脊椎動物骨架的發(fā)育有著密切的關(guān)系,。軟骨細胞能分泌和響應一系列的生長因子,，包括IGF-1和IL1。體外培養(yǎng)的軟骨細胞是研究軟骨修復和關(guān)節(jié)炎病理的有用模型,。

1.吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次,；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液,，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后,，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3.用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4.待細胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基,。

備注：由于實驗所用試劑,、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考

客戶在細胞培養(yǎng)過程中,，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務電話： 按 2,，我們隨時給予解答。

1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月,。

2.在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作,。

3.傳代培養(yǎng)過程中,，消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài),。

4.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。